目的:铁是一种人体必需的微量元素,但当铁过载时又可能会对机体造成损害。过量的铁积累于血管常造成血管内皮细胞(VECs)损伤,其所涉及的机制最初被认为与过量产生的活性氧(ROS)有关。非对称二甲基精氨酸(ADMA)是机体内调节NOS-NO系统的重要物质,能通过抑制一氧化氮合酶(NOS)使NO合成减少,从而导致内皮功能失调。ADMA主要由二甲基精氨酸二甲基氨基水解酶(DDAH)催化降解,而DDAH对ROS极其敏感。铁过载可导致氧化应激增加,而槲皮素(Que)作为黄酮类化合物,具有一定的清除自由基的能力。因此,本文旨在探讨Que是否能通过ROS/ADMA/DDAHⅡ/eNOS/NO途径减轻铁过载所致HUVECs损伤。方法:本文采用终浓度为50μM右旋糖酐铁(Iron)处理细胞48h对HUVECs构建铁过载损伤模型。通过MTS法检测细胞存活率,微板法检测细胞LDH的释放,检测SOD、GSH-Px活性,MDA含量,NO含量,HPLC检测ADMA、DDAHⅡ浓度,Western blotting法检测eNOS、p-eNOS、DDAHⅡ、cleaved-caspase 3蛋白表达,流式细胞仪检测细胞凋亡、细胞内ROS水平、线粒体膜电位(Δψ_m),分光光度法检测线粒体通透性转换孔(mPTP)开放程度。同时,加入抗氧化剂Que与Iron共孵育,检测上述指标的变化。另外,设立ADMA竞争性抑制底物L-Arg组,mPTP关闭剂CsA组,及自由基清除剂Eda组,作为阳性对照。结果:1.与Control组相比,HUVECs经50μM Iron处理后,细胞存活率降低、LDH活性增高,细胞凋亡率增多,cleaved-caspase 3蛋白表达增多;2.20μM Que处理HUVECs后,细胞存活率升高、LDH活性减弱,SOD、GSH-PX活性升高,MDA含量降低,DDAHⅡ活性及蛋白表达升高,ADMA浓度降低,NO含量升高,p-eNOS/eNOS蛋白比率升高,ROS水平降低,Δψ_m趋稳,mPTP开放被抑制,细胞凋亡率减少。其作用效果与L-Arg、CsA及Eda的处理效果相似;3.细胞感染pAD/DDAⅡ-shRNA腺病毒后,Que的上述作用被减弱。结论:槲皮素能减轻铁过载诱导的HUVECs氧化应激损伤和线粒体功能障碍,其作用机制可能与ROS/ADMA/DDAHⅡ/eNOS/NO通路有关。