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本试验将纯化的犬瘟热病毒与弗氏佐剂等量混合乳化后，分别于家兔背部皮下及腿部肌肉多点注射，免疫4次（每次间隔2周）后用纯病毒加强免疫制备了兔抗犬瘟热多克隆抗体，多克隆抗体采用饱和硫酸铵分级沉淀法纯化，纯化后抗体用SDS-PAGE鉴定提纯效果，间接ELISA法检测抗体纯化前后的效价，考马斯亮蓝法测定提纯后IgG含量;以犬瘟热病毒为包被抗原，饱和硫酸铵纯化的多克隆抗体为竞争抗体建立了检测犬瘟热抗体的竞争ELISA技术;利用柠檬酸三钠还原氯金酸制备了40nm胶体金颗粒标记单克隆抗体5B7，将单抗5B7、羊抗鼠IgG分别包被于NC膜作为检测线（T线）和对照线（C线），金标单抗2D6吸附于金标垫，组装试剂条，建立了检测犬瘟热病毒的胶体金免疫层析诊断方法。
试验结果显示:多抗片段为一条轻链和一条重链，大小分别为25KD和50KD;提纯后抗体杂带较少;纯化前后抗体效价未发生改变，均为1∶102400;纯化后抗体含量为4.1mg/ml。竞争ELISA体系包被抗原的最适包被浓度为0.625μg/ml;最佳包被液为0.05mol/LpH9.6碳酸盐缓冲液;最佳包被条件为37C2h后4℃过夜;兔抗犬瘟热IgG最佳稀释度为1∶1600;封闭液为5％小牛血清，37℃温育1h为最佳封闭条件;血清与抗原作用的最佳作用时间为45min;HRP-羊抗兔IgG做1∶1000倍稀释，37C温育1h为最佳酶标二抗作用条件;底物最佳反应条件为370C避光反应15min;确定反应阴阳抑制率限制为30％;检测阴阳血清ELISA技术与琼脂扩散试验符合率达到95.7％、97.8％;所建立的ELISA检测技术与其他貂病没有交叉反应，表明建立的ELISA诊断技术具有良好的特异性。胶体金与单抗标记的最佳pH为8.2;胶体金最适稳定量为30μg/ml;金标抗体的最佳稀释倍数为1∶2;配方C稀释金标抗体后溶液颜色不变，背景浅，金标抗体释放较完全;利用组装的试纸条检测样品，阳性结果为试纸条上的T线与C线均呈红色，阴性结果仅C线呈红色;试纸条最低检测限为9ng/ml;试剂条在4℃保存期为6个月;试剂条检测细小病毒、传染性肝炎阳性样品，结果均为阴性，证明建立的胶体金免疫层析诊断技术具有良好的特异性和重复性。