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大肠杆菌是引起奶牛乳腺炎最主要的病原菌,大多引起临床型乳腺炎,严重的引发乳腺纤维化。本实验目的是探讨当大肠杆菌作用于奶牛乳腺上皮细胞(BMEC)时对TGF-β1、TPR1、bFGF、FGFR2、PDGF和PDGFRβ的表达影响,以及宿主对大肠杆菌的免疫应答过程中是否有TLR2和TLR4的参与,且其作用如何,以便探索奶牛乳腺纤维化的发病机理,为奶牛乳腺纤维化的防治提供指导。本实验采用热灭活大肠杆菌菌液(0.105cfu/mL、106cfu/mL、108cfu/mL)作用于体外培养的BMEC,于不同时间点(6h、12h、24h、48h)用荧光定量PCR和Western blot两种方法检测受作细胞TGF-β1、bFGF、PDGF及其受体mRNA及蛋白的表达,同时采用相同方法检测TLR2和TLR4 mRNA及蛋白的表达,采用Western blot方法检测AP-1和NF-κB蛋白的表达情况。研究结果表明：(1)不同浓度的热灭活E.coli作用于BMEC,不同时间点(6h、12h、24h、48h)均可促进TGF-β1、bFGF和PDGF及其受体mRNA和蛋白的表达。TGF-β1、 bFGF和PDGF及其受体的表达水平基本随着时间的延长、浓度的增加而增加,呈时间和浓度依赖性。TGF-β1、TβR1 mRNA表达水平在12h最高,蛋白表达水平在24h最高,106cfu/mL菌液浓度处理组在四个时间点表达水平均最高;bFGF和FGFR2 mRNA和蛋白表达水平均高于对照组,24h表达水平最高；PDGF-BB mRNA表达量在12h达到最大,PDGF-BB蛋白表达量在24h达到最大。PDGFRβ蛋白表达水平在12h达到最高。(2)热灭活E.coli作用于BMEC均能促进TLR2和TLR4 mRNA和蛋白的表达。TLR2和TLR4的表达水平基本随时间的延长,浓度的增大而增高。TLR2 mRNA表达水平在12h达到最高,与对照组相比差异极显著(P<0.01), TLR2蛋白表达水平在48h达最高,差异显著(P<0.05); TLR4mRNA表达水平在24h达到最大。TLR4蛋白表达水平均高于对照组,有统计学意义。(3)热灭活E.coli能促进NF-κB和AP-1蛋白表达,表达水平均高于对照组,基本呈时间和浓度依赖性。NF-κB蛋白表达水平与对照组相比虽不具有统计学意义(P>0.05),但均较对照组高,105cfu/mL菌液处理组浓度表达水平最高。AP-1表达水平随着时间的延长,浓度的增大,表达增加,106 cfu/mL浓度表达水平最高,在12h、24h差异极显著(P<0.01)。综上所述,热灭活的E.coli可以促进BMEC TGF-β1、bFGF和PDGF三种细胞因子及其受体的mRNA及蛋白的表达,呈一定的时间和浓度依赖性；热灭活E.coli可促进TLR2、TLR4mRNA及蛋白的表达,具有时间和浓度依赖关系；热灭活E.coli促进BMEC NF-κB和AP-1的蛋白的表达,提示E.coli促进BMEC表达促纤维化细胞因子,可能与NF-κB和AP-1信号转导通路的激活有关。