【摘 要】
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本研究对鸭源肠炎沙门氏菌和鼠伤寒沙门氏菌开展了以下研究:1.鸭源SE和S.typhi的RAPD分析采用随机扩增多态性DAN(RAPD)技术,利用40条随机引物对32株致病性肠炎沙门氏菌(Salmo
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本研究对鸭源肠炎沙门氏菌和鼠伤寒沙门氏菌开展了以下研究:1.鸭源SE和S.typhi的RAPD分析采用随机扩增多态性DAN(RAPD)技术,利用40条随机引物对32株致病性肠炎沙门氏菌(Salmonella enteritidis,SE)、15株鼠伤寒沙门氏菌(S.typhimurium,S.typhi)进行RADP分析,获得结果如下:(1)随机引物的筛选:40条随机引物中能用于本试验聚类分析和遗传距离远近关系分析的有A05、C14、C17。(2)扩增结果:所有扩增出的片段分子量在0.2—0.3kb之间。(3)3条引物进行的聚类分析结果符合传统的分类:肠炎沙门氏菌、鼠伤寒沙门氏菌各自聚为一类,在相似性系数为0.75时聚在一起。(4)基本能把不同地区分离的菌株各自聚为一类,但GH1、GH2、GH3先与XJ在相似性系数为0.9246时相聚,然后再在0.9138时与GH4、5、6、7、8、9、10、11相聚。2.鸭源SE外膜蛋白基因克隆和原核表达根据GenBank中登录SE的OMP基因序列设计两对引物(未去信号肽和去信号肽),从SE菌GH2株中扩增出OMP基因(未去信号肽和去信号肽)并将其克隆到pMD18-T载体上,经PCR、酶切和DNA测序鉴定之后,将OMP基因正向插入原核表达载体pET-32a(+)的EcoRⅠ和XhoⅠ位点间,成功构建了重组表达质粒pET-32a-OMP(未去信号肽和去信号肽)。重组表达质粒pET-32a-OMP(未去信号肽和去信号肽)转化表达宿主菌BL21(DE3),经IPTG诱导,含pET-32a-OMP(去信号肽)的表达菌表达出大小约为55KD的OMP重组蛋白,而含pET-32a-OMP(未去信号肽)的表达菌不表达。对表达的重组蛋白进行了可溶性与不可溶性分析,结果表明表达产物主要以不溶性包涵体的形式存在。对重组蛋白进行纯化,得到较纯的重组蛋白。以兔抗SE阳性血清对未纯化和纯化的重组蛋白进行免疫印迹检测,结果表明表达蛋白能够被阳性血清识别,具有良好免疫反应原性。
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