鸡传染性支气管炎病毒山东分离株S1和N基因的遗传变异分析

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为探明山东地区IBV的分子流行病学情况,本文挑取实验室1992-2005年间分离,曾经对分离鸡群造成严重损失的疑似IBV流行株,对病毒的S1、N基因进行分析比较,从分子水平上探讨山东省IBV的流行和变异规律。主要研究内容如下: 试验一鸡传染性支气管炎病毒山东流行株的鉴定对8株山东疑似IBV流行株,进行了致鸡胚矮小化试验、新城疫病毒干扰试验、动物回归试验、血凝性试验和理化性质测定,证实该8株山东分离株均为IBV,命名为:SDD、SDB、SH、IBVQ、LC2、WF、HD和GE。该8株IBV与H120阳性血清进行气管环组织培养交叉中和试验,试验表明:SH、WF、LC2与H120阳性血清交叉指数高。 试验二传染性支气管炎病毒山东分离株S1基因的遗传变异性分析参照已发表的IBVS1基因序列,设计一对特异引物,通过RT-PCR均扩增出8株IBVS1的目的条带,并对其克隆测序。将8株山东省IBV分离株与参考株的S1基因进行序列分析比较,山东株间核苷酸同源性为77.7%~997.%,氨基酸同源性在78.5%-97.7%,系统发生树分析发现山东地方流行株均属于同一群,表明8株山东IBV分离株具有较近的亲缘关系,说明山东省IBV的分离毒株有明显的地域性,时间性不明显。 试验三鸡传染性支气管炎病毒山东流行株和疫苗株N基因遗传变异分析参照已发表的IBVN基因序列,设计一对特异引物,通过RT-PCR扩增出9株IBV(SDD、SDB、SH、IBVQ、LC2、WF、HD、GE和山东分离株IBVZ)、3株疫苗株(H120、H52、Ma5)、变异株4/91、标准株M41的N基因序列,克隆测序,将以上14株IBV及参考株的N基因进行序列分析,发现8株嗜肾型山东地方流行株(SDD、SDB、SH、IBVQ、LC2、WF、HD、IBVZ)间氨基酸序列同源性为92.9%-99.3%,4株疫苗株间(H120、H52、Ma5、M41)的氨基酸序列同源性92.2-99.3%%,而8株嗜肾型山东分离株与6株参考株间的氨基酸序列同源性87%-92.2%,说明山东地方流行株间具有较近的亲缘关系,疫苗株间亲缘关系较近,N基因蛋白在进化过程中存在一定的变异,但比S1基因保守。 试验四鸡传染性支气管炎病毒S1和N基因遗传变异相关性的研究对9株山东流行株、4株疫苗及变异株4/91的S1基因片段和全长、N基因的片段和全长、S1和N基因全长分别进行遗传变异的研究,利用统计学软件SPSS11.5进行同源性相关分析,结果表明:不同IBV毒株S1基因片段与其全长之间,核苷酸(r≥0.892)、氨基酸(0.854≤r≤0.935)遗传变异高度相关,不同IBV毒株N基因片段与其全长之间,核苷酸(r≥0.941)、氨基酸(0.878≤r≤0.979)遗传变异高度相关。但S1与N基因全长之间核苷酸的遗传变异呈现中度相关(r=0.645)。国内IBV疫苗株之间S1和N基因核苷酸高度同源(S1≥97.3%;N≥90.7%),而野毒株与疫苗株相比S1和N基因同源率均较低(S1≤84.3%;N≤87.1%),这就解释了常规疫苗不能很好的保护野毒株的现象。
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