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反复自然流产(recurrent spontaneous abortion, RSA)是生育期女性常见的并发症之一,是指自然流产次数≥3次。据报道,RSA的发生率为0.5%-1.0%,约占流产总发生率的15%-20％[1]。表现为腹部疼痛和停经后阴道出血,其发病原因较为多样化,由多种机制引发,包括解剖因素、内分泌失调、染色体结构与功能的异常、生殖系统的感染、免疫学因素等,目前约有半数的RSA原因不甚明确,多数可能是母胎免疫调节异常所致。近年来随着免疫学领域的迅速拓展,发现RSA的发生与免疫因素密切相关。近年来,关于RSA的免疫学作用机制,研究热点主要集中在Treg和Th17细胞上。Treg细胞的产生主要来源于中枢免疫器官——胸腺。在外周血中Treg细胞约占淋巴细胞总数的5%-10%,是一类具有免疫负调节效应的淋巴细胞亚群。Treg细胞增生能力较低,通过对自体抗原的识别达到对潜在炎症性的效应T细胞的免疫负调节,将机体的免疫应答强度控制在一定范围内,降低对自体器官的免疫性损伤,使机体免疫系统的平衡得以维持。Treg细胞在针对机体的免疫性疾病、移植物抗宿主反应、肿瘤免疫监视和母胎之间局部免疫平衡的维持中均具有关键作用。所以,该领域的研究广受关注,是免疫学研究的热点方向。Treg细胞具备两大经典的免疫学特性：一是免疫反应的低下性；二是免疫负调节性。免疫反应低下即免疫无能,指Treg细胞对各类蛋白抗原、多糖类抗原的刺激均不发生反应。免疫负调节性即免疫抑制,指Treg细胞一方面可以通过直接接触或分泌抑制性的免疫因子来对CD4+T、CD8+T淋巴细胞、NK细胞等的增生与活化起抑制,还能下调B淋巴细胞、和DC的功能。Treg细胞的这两大经典的免疫学特性在多种免疫病的病理生理进程中起着至关重要的作用,上调可降低自身免疫性病的发病风险,减轻抑制排斥反应；下调可进行免疫监视功能。Foxp3即叉状螺旋转录因子3(forkhead/winged helix transcription factor， Foxp3),属于fox head因子家族中的一员,是当前公认的CD4+CD25+Treg细胞的最具特异性的分子标记,对该细胞的分化和发育功能的调节起着关键作用。Foxp3DNA位于人类的X染色体上(Xp11.23-Xp13.3),其DNA序列在人类中高度保守。Th17是在Park等研究人员在针对实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis, EAE)和胶原反应性关节炎(collagen-induced arthritis, CIA)两类疾病的实验研究中证实的。既往研究认为,这两种疾病均属自身免疫病,并且是经Thl型效应T细胞介导。但随后有学者在研究CIA的发病中发现：小鼠体内的IL-17经特异性的抗体中和或消除后,小鼠的关节炎症状有显著好转。相应的,体内未经IL-17中和性抗体治疗的小鼠,关节炎反应显著恶化。基于上述研究,提出Th17细胞这一新型的淋巴细胞概念。因其特异性分泌大量高浓度IL-17因子,所以将其命名为Th17。维甲酸相关核受体(Orphan nuclear receptor, RORyt)是Th17细胞关键性的转录因子控制着该细胞的增生及分化。RORγt能够诱导编码IL-17A——F的一些下游基因的表达。初始CD4+T细胞可分化为同时表达RORγt和Foxp3的Th17/Treg过度类型的中间细胞。中间细胞是向Th17方向分化还是向Treg方向分化主要由外周血中所存在的不同类别的细胞因子决定。TGF-β (β(?)中瘤生长因子)可诱导初始CD4+T淋巴细胞向Treg细胞方向分化,但IL-6被加入之后,该分化路径受到抑制,促使过度类型细胞分化发育为Th17细胞。因此,IL-6在决定初始CD4+T淋巴细胞的分化方向上有着不可或缺的作用。IL-17具有多种生物学活性,可促进中性粒细胞的增生、活化及发育成熟。IL-17可诱导前列腺素E2、VEGF等的分泌以及急性时相反应蛋白MCP的表达,促进Th1、Th2等效应细胞产生TNF-a,IL-1、IL-8,发挥炎症性反应的作用。在针对人类自身免疫系统疾病的研究中发现：系统性红斑狼疮(SLE)、多发性硬化(SSA)、炎症性肠道疾病、川崎病、类风湿性关节炎(RA)等一系列的自身免疫性疾病患者的外周血中及病变组织部位均有相应程度的IL-17表达上调。综上所述,不难发现,Treg细胞及其转录因子Foxp3、Th17细胞及其转录因子ROR γt、相关调节因子IL-6、IL-17、TGF-β均在RSA的发生、发展进程中发挥着重要的作用。基于此,我们设计如下实验。目的本研究通过检测RSA患者外周血Th17和Treg细胞特异性转录因子RORyt mRNA和Foxp3mRNA的表达及IL-6、IL-17、TGF-β的水平,探讨Th17和Treg细胞在RSA发病中的作用。材料与方法收集2011年10月至2012年6月郑州大学第三附属医院50例RSA患者为研究对象,同期选取50名健康早孕女性作为正常对照组。采用real-time PCR方法测定外周血ROR-yt和Foxp3mRNA的含量,并分析二者之间的相关性；采用ELISA测定血清中IL-6、IL-17、TGF-β的含量。应用SPSS17.0软件,对正态分布计量资料采用(?)±s表示,采用t检验进行统计分析,相关性采用Pearson相关性分析,以a=0.05为检验水准。结果1.RSA组RORyt mRNA水平(25.358±9.236)显著高于正常对照组(10.611±5.792, P<0.05); Foxp3mRNA水平(6.851±2.875)显著低于正常对照组(32.218±5.023, P<0.05);2.RSA患者RORyt和Foxp3mRNA表达呈显著负相关(r=-0.530,P<0.05)；3.RSA组IL-6、TGF-β1含量分别为(82.7±23.2)、(269.3±29.6) pg/ml,明显低于正常对照组(210.4±40.6)、(497.8±54.6) pg/ml (P<0.05); IL-17含量(172.8±33.9) pg/ml明显高于正常对照组(53.4±10.8) pg/ml (P<0.05)。结论1.RSA的发生与Th17和Treg细胞的RORyt和Foxp3mRNA含量异常相关,RORyt mRNA水平上调与Foxp3mRNA水平下调导致的Th17与Treg细胞的免疫失衡是RSA的原因之一；2.IL-6、IL-17、TGF-β1含量的异常改变在RSA的发病中亦起重要作用。