论文部分内容阅读
藻蓝蛋白(phycocyanin,PC)是藻胆蛋白的重要组分,主要存在于蓝藻、红藻、隐藻和少数一些甲藻中,是这些藻类进行光合作用的捕光色素之一。研究表明,藻蓝蛋白具有众多医疗保健功能,比如抗炎症、抗氧化、清除自由基等,并具有一定的抗肿瘤功效。藻蓝蛋白的这些属性,使它在食品、化妆品、医药等领域,具有广阔的应用前景。由于藻蓝蛋白具有如此多的生物学、医学用途,使其具有广阔的市场需求。
本实验以盐生隐杆藻藻为实验材料,建立起一套高效、简便的藻蓝蛋白分离纯化工艺纯化盐生隐杆藻藻蓝蛋白。在试验中我们探讨了藻蓝蛋白的高效纯化方法,并进行了藻蓝蛋白的稳定性和抗氧化活性研究。
运用条件比较温和的反复冻融法来破碎细胞,既保证了藻体的充分破碎,又最大限度的避免了藻蓝蛋白的变性。通过优化藻蓝蛋白的层析条件,不仅提高了藻蓝蛋白纯度,而且大大提高了藻蓝蛋白的纯化速度,简化了纯化中的步骤。
经过磷酸缓冲液反复冻融法提取、硫酸铵分步沉淀和DEAE-Sepharose FastFlow柱层析,分离纯化得到盐生隐杆藻藻蓝蛋白(AH-PC),其纯度(A620/A280)达到4.58,最终得率为52.65%。纯化的AH-PC最大吸收峰为620 nm,其室温荧光发射峰为646 nm,SDS-PAGE电泳显示其α和β亚基的分子量分别为17218 Da和20844 Da,分子排阻HPLC测得其分子量为76158 Da,表明其在pH7.2下是以(αβ)2二聚体状态存在于溶液中。
稳定性实验表明,黑暗、pH5~8以及0~2 M NaCl等条件下AH-PC是稳定的。抗氧化实验显示,不同浓度的AH-PC组分对过氧化氢自由基均有一定程度的清除作用,且随着浓度的增加清除率随之增加,在20~100μg/mL的剂量范围内具有良好的剂量关系。温度和pH对AH-PC的稳定性都有影响,但对清除自由基的能力的影响却不尽相同,导致这种不同的原因尚待进一步研究。
这些实验结果将为开发利用AH-PC提供参考。