漆酶(EC1.10.3.2)是一种含铜多酚氧化酶,在环境、纺织等工业上均有广泛应用。在漆酶发酵制备技术中,共培养已成为一种有效提高漆酶发酵水平的培养方式。目前有关共培养提高漆酶酶活的具体机制并不十分明确,本课题组前期研究发现β-胡萝卜素为阿魏蘑和胶红酵母共培养过程中提高漆酶活性的关键因子,在此基础上本文深入探究了该促进因子的作用机理,从而为今后的漆酶高水平发酵奠定理论基础,主要研究内容与结果如下:(1)分别对阿魏蘑单培养及其与胶红酵母共培养发酵液进行纯化,得到电泳纯漆酶蛋白,对其进行酶学性质探究。结果显示单培养与共培养漆酶的最适温度均为60℃、最适pH均为4.0、对ABTS的米氏常数Km值分别0.182 mmol·L-1和0.193 mmol·L-1、金属离子以及抑制剂对两者的影响基本相同,说明两者的酶学性质并无明显差异。(2)在扩增得到漆酶的全长cDNA序列、基因组DNA序列的基础上,利用荧光定量扩增技术进行转录水平分析。结果显示加入β-胡萝卜素后,漆酶基因的相对转录量升高,并在第5天达到最大。该结果说明β-胡萝卜素对漆酶基因转录有促进作用。(3)扩增得到约900 bp的上游序列,对其进行分析后发现,其中存在多个与胁迫相关的响应元件如外源性生物反应元件(XRE)、压力响应元件(STRE)、氧化胁迫响应元件(SKN7)等,这些响应元件能影响相应结构基因的转录。β-胡萝卜素的加入可能对阿魏蘑生长起到了某种胁迫作用,进而激活了响应元件使漆酶基因转录效率提高。(4)利用双向电泳技术对单培养及加入β-胡萝卜素培养的阿魏蘑胞内蛋白进行表达差异分析,质谱结果显示有9个与阿魏蘑产漆酶相关的差异蛋白,它们大多与蛋白质合成以及生物体能量代谢有关。