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目的:艰难梭菌(Clostridium difficile,CD)是梭菌属中的一种专性厌氧菌,可形成卵圆形芽孢,位于菌体次极端。该菌主要通过粪口途径进行传播,并且可导致艰难梭菌相关性腹泻(Clostridium difficile associated diarrhea,CDAD)。据文献报道健康成人艰难梭菌的携带率大约是1%-7%,而儿童的携带率可高达75%,但往往都没有表现出腹泻等相应的临床症状。艰难梭菌芽孢对消毒剂如乙醇、肥皂、高温和干燥有很强的抵抗力,可以在物体表面存活数月到数年,利于其传播。一般认为艰难梭菌感染与抗生素使用及住院史有关,但最近研究表明艰难梭菌感染的流行状况和发病率正发生改变,尤其是在没有使用过抗生素及无CDAD危险因素的人群中艰难梭菌感染的比例不断上升。国外对健康人群艰难梭菌的携带情况已有相关数据,但国内尚缺乏相关研究并且存在地理位置、种族和生活习惯等差异。因此本研究为了解河北地区健康人群艰难梭菌的流行病学特征,拟对健康人群携带菌株的相关特征做一系列研究如PCR核糖体分型、多位点序列分型(Multilocus sequence typing,MLST)和耐药情况,以期为艰难梭菌感染(Clostridium difficile infection,CDI)的防控提供依据。方法:1从2013年9月至2014年9月期间,收集邢台某县健康婴儿(<1岁)粪便标本36份;邢台一所幼儿园和沧州两所幼儿园健康儿童(1-8岁)粪便标本共1661份;社区健康体检成人(>18岁)粪便标本1654份和医务工作者粪便标本348份,以上人群均不存在腹泻等相应临床症状。2对粪便标本采用富集芽孢法进行厌氧培养,根据艰难梭菌的扁平状菌落、镜下革兰染色细菌形态及芽孢位置、马厩性气味以及生化反应进行鉴定。3采用细菌基因组DNA提取试剂盒提取DNA,对提取的DNA采用多重PCR检测毒素(tcd A、tcd B、cdt A、cdt B)和16Sr DNA以此符合艰难梭菌的鉴定。4对所有菌株进行核糖体分型,分型结果使用Quantity One软件进行比较;对产毒株进行MLST分型,采用START2系统对ST序列进行聚类分析;用e BURST v3软件将ST型进行亲缘关系分析。将健康人群分离到的菌株与CDI患者的菌株进行型别比对,分析同源性。5采用琼脂稀释法测定艰难梭菌对万古霉素、甲硝唑、非达霉素、利福昔明、左氧氟沙星、环丙沙星、美罗培南和氯霉素的最低抑菌浓度(minimal inhibitory concentration,MIC)。结果:1从36份婴儿粪便标本中共分离培养出艰难梭菌9株,总携带率为25%(9/36),7株艰难梭菌均为tcd A+tcd B+cdt A-cdt B-,产毒株携带率为19.4%(7/36);1661份幼儿园健康儿童粪便标本中共分离培养出艰难梭菌222株,总携带率为13.4%(222/1661),其中146株为tcd A+tcd B+cdt A-cdt B-,产毒株携带率为8.7%(146/1661);邢台A幼儿园、沧州B幼儿园及沧州C幼儿园儿童携带率分别为13.6%(127/931)、13.1%(79/600)、12.3%(16/130)。1654份健康成人粪便标本中共分离培养出艰难梭菌91株,总携带率为5.5%,其中59株为tcd A+tcd B+cdt A-cdt B-,1株为tcd A+tcd B+cdt A+cdt B+,产毒株携带率为3.6%(60/1654)。348份医务工作者粪便标本中共分离培养出艰难梭菌22株,总携带率为6.3%(22/348),其中13株为毒素tcd A+tcd B+cdt A-cdt B-,产毒株携带率为3.7%(13/348)。2 PCR核糖体分型共分为24个不同的型别,和河北地区成人住院腹泻患者艰难梭菌分离株相比,腹泻患者的12个型别除1个型别(1株),其余11个型别在健康人群中均有发现。226株产毒艰难梭菌被分为27个不同的ST型,其中ST54型(等位基因谱1-4-7-1-1-3-3)66株,ST3型(等位基因谱1-1-2-1-1-1-1)58株,ST35型(等位基因谱2-5-8-1-1-3-6)24株,ST2型(等位基因谱1-1-2-1-5-3-1)22株,此4个型别占到菌株数的75.2%(170/226)。此外本研究还发现3个新的ST型,分别为ST286(等位基因谱1-1-2-3-1-5-3)1株,ST289(等位基因谱1-1-7-1-5-3-1)1株和ST290(等位基因谱13-17-22-33-26-38-40)1株。ST型别与宿主人群来源之间不存在明显的相关性,STs-2,3,35,37,53,54,和55的菌株既有来自健康人群的菌株也有来自腹泻患者的菌株。3所有菌株对万古霉素、甲硝唑、非达霉素和利福昔明均高度敏感。但是对左氧氟沙星和环丙沙星的耐药率较高,分别为39.8%和98.3%。对美洛培南和氯霉素的耐药率较低,分别为1.45%和2%。结论:1河北地区健康婴儿和幼儿园健康儿童艰难梭菌的携带率与国外报道相比偏低,但产毒株携带率较高;其中婴儿艰难梭菌定植率和添加辅食有相关性。社区健康成人、医务工作者艰难梭菌的携带率与国外报道相似。2目前本研究发现在河北地区健康人群中艰难梭菌以ST54和ST3为优势型别,其中健康儿童以ST3和ST54为主,健康成人以ST54为主。3健康人群携带的艰难梭菌与引起CDI的菌株具有同源性,提示无症状定植人群可能作为艰难梭菌及其芽孢的储存库,成为社区获得性CDI潜在的传染源。4目前河北地区健康人群携带的艰难梭菌对万古霉素、甲硝唑、非达霉素、利福昔明均敏感,对美罗培南和氯霉素耐药率较低,但对左氧氟沙星、环丙沙星耐药率较高。