论文部分内容阅读
目的：1)开发出新的基因克隆方法，2)对几种鱼类、鸟类的FBN1基因进行克隆，3)对这些基因进行遗传进化学研究，分析R1170H为马凡综合症致病突变的可能性。 方法：通过对现有物种原纤维蛋白-1（Fibrillin-1，FBN-1）蛋白氨基酸序列分析，设计可用于多物种FBN1基因克隆的摇摆引物，运用反向巢式PCR对鸡、火鸡、鲤鱼、虹鳟鱼、黑牛头鱼的cDNA进行扩增，测序分析PCR产物。运用GENERUNNER软件对新克隆的FBN1cDNA序列进行分析，并由各cDNA序列推测其氨基酸序列。采用invitrogen公司的Alignx软件对NCBI中人类、牛、猪、大鼠、小鼠、鸡以及新克隆的鸡、火鸡、鲤鱼、虹鳟鱼、黑牛头鱼FBN1蛋白序列中1107位氨基酸在遗传进化史上的保守性进行分析。 结果：运用我们新开发的反向巢式PCR成功克隆了鸡、火鸡、鲤鱼、虹鳟鱼、黑牛头鱼的FBN1基因片段，鸡的FBN1序列与GENBANK中gi|50752970|ref|XM413815.1|Gallus gallus fibrillin 1基因的部分序列完全相同，其余四个物种的FBN1基因片段为新克隆基因序列，已登录GENBANK，其登录编号分别为：DQ314744、DQ314745、DQ314743、DQ314746。 运用GENERUNNER软件对我们克隆的鸡、火鸡、鲤鱼、虹鳟鱼、黑牛头鱼的序列进行分析，结果显示：鸡的FBN1蛋白中编码1170位氨基酸的碱基为GTA，其对应的氨基酸为