第一部分病原相关分子模式对表皮细胞增殖与分化的影响背景:皮肤是保护人体的第一道屏障,皮肤微生物作为皮肤组成的一部分,对皮肤的结构和生理至关重要。微生物有促进皮肤自我调节的作用,但具体机制不清。本部分分别采用人角质形成细胞Ha Ca T和离体3D皮肤皮脂腺模型,研究病原相关分子模式（Pathogen-associated molecular patterns,PAMPs）体外对人表皮细胞增殖与分化的影响,探究皮肤微生物对皮肤生理病理功能的影响。方法:人永生化Ha Ca T角质形成细胞,采用免疫印迹法（Western-blot）检测脂多糖（Lipopolysaccharide,LPS）5 mg/ml,磷壁酸（Lipoteichoic acid,LTA）5 mg/ml和肽聚糖（Peptidoglycan,PGN）10 mg/ml刺激后,外膜蛋白（Involucrin,IVL）、兜甲蛋白（Loricrin,LOR）的表达水平;采用人皮肤和永生化SZ95皮脂腺细胞体外共培养的3D皮肤皮脂腺培养模型,分别加入2、20、200μg/ml的LPS,LTA,PGN。培养7天后,使用Photo Shop软件计算苏木素-伊红（Hematoxylin and Eosin,HE）染色切片中表皮面积;免疫组化观察细胞增殖核抗原Ki67,角蛋白10（Cytokeratin 10,CK10）的表达,使用Image J软件计算染色面积,Image-Pro Plus软件计算每张图片的每个蛋白的累积光密度（Integrated optical density,IOD）。结果:LPS,LTA,PGN能促进人角质形成细胞IVL和LOR的表达。在3D皮肤皮脂腺模型上,表皮增厚分别在200μg/ml浓度的LPS、LTA和20μg/ml浓度的PGN达到最大值。LPS和LTA在200μg/ml时表皮厚度高于其他两个实验浓度（P<0.01）;PGN在20μg/ml浓度时表皮增厚高于2μg/ml（P<0.001）,与200μg/ml浓度时表皮增厚比较无统计学差异;表皮基底层及角质层细胞Ki67及CK10的表达也呈现不同程度的增加。结论:PAMPs体外剂量依赖性促进表皮细胞的增殖与分化,这暗示皮肤微生物群可能参与了皮肤表皮与屏障的形成。第二部分病原相关分子模式对3D皮肤皮脂腺模型皮脂腺脂质分泌的影响背景:前面我们探究了皮肤微生物PAMPs对表皮细胞增殖和分化的作用,本部分我们进一步探讨PAMPs体外对人皮脂腺细胞分化和脂质合成的作用,评估微生物对皮脂腺细胞形态和功能的影响。方法:在体外3D皮肤皮脂腺模型上,分别加入不同浓度的PAMPs（2、20、200μg/ml的LPS,LTA和PGN）。培养7d后,使用HE染色观察毛囊皮脂腺结构形态的变化;使用冰冻切片油红染色观察在不同浓度的LPS,LTA和PGN刺激下,皮脂腺细胞脂质分泌情况;使用Image J软件计算每张切片中皮脂腺油红染色面积,以及Image-Pro Plus软件计算皮脂腺油红染色的IOD值。结果:在2μg/ml浓度LPS,LTA,PGN作用下,各实验组皮脂腺皮脂分泌增多（P<0.05）;当刺激浓度加大为20μg/ml时,皮脂腺体积缩小,脂质分泌减少（P<0.05）;当刺激浓度进一步加大为200μg/ml时,皮脂腺萎缩明显,且脂质分泌进一步减少（P<0.01）,在HE染色切片中可观察到皮脂腺毛囊发生异常角化。结论:PAMPs可以调节皮脂腺分化与脂质合成。这可能是皮脂腺进行自我调节的机制之一。