G蛋白偶联受体173（orphan G protein-coupled receptor:Gpr173）是一种在哺乳动物脑中表达的并高度保守的受体。Phoenixin（Pnx）是一种新发现的神经肽,在小鼠中已证实Gpr173是Pnx的受体,两者都参与了生殖调控。本实验室前期的研究发现,金钱鱼Pnx可以提高脑垂体中Gn RHR,LH和fsh等生殖相关基因的表达。但其受体Gpr173在金钱鱼生殖调控中的作用及作用机理并不清楚。为此,本研究克隆了金钱鱼Gpr173基因;分析了Gpr173基因的序列特征和在组织、性腺发育中的时空表达特征;雌二醇（E₂）和金钱鱼Pnx以及DHA、EPA和油酸对Gpr173表达的影响、Gpr173对Pnx介导的基因表达和信号传导通路的影响。本文拟阐明金钱鱼Gpr173与Pnx间相互关系以及Gpr173在Pnx信号途径中的作用。本研究结果有助于更深入地了解神经肽对鱼类生殖系统调控的机理,丰富和完善鱼类乃至脊椎动物的生殖内分泌调控网络。具体研究结果如下:1.金钱鱼Gpr173基因克隆及时空表达分析通过基因克隆获得了两种基因亚型（Gpr173-1和Gpr173-2）并分析了其序列特征。q PCR检测组织分布发现:Gpr173-1和Gpr173-2主要在下丘脑和垂体表达。QPCR检测发现:在卵巢发育过程中,下丘脑中Gpr173-1主要在Ⅱ和Ⅴ期有高的表达,Gpr173-2也在Ⅴ期有高表达,垂体中Gpr173-1和Gpr173-2都在Ⅲ期表达量最高;在精巢发育过程中,下丘脑中Gpr173-1和Gpr173-2的表达量逐渐增加,在Ⅴ期达到最高;脑垂体中Gpr173-1和Gpr173-2的表达无显著差异。WB检测发现Gpr173在全脑和精巢中有蛋白信号条带,而卵巢中没有。2.Pnx、E₂、DHA、EPA和油酸对金钱鱼Gpr173表达的影响Pnx在体注射6h后,q PCR结果表明,Pnx-14显著促进下丘脑Gpr173-1表达,而且显著抑制Gpr173-2的表达;而Pnx-20也能显著促进Gpr173-1的表达。10ng/gbw组Pnx-20抑制Gpr173-2的表达。Pnx-14处理下丘脑原代细胞6h后表明,Pnx-14显著促进Gpr173-1的表达;但对Gpr173-2没有影响。金钱鱼雌鱼E₂在体注射6h后,E₂显著提高下丘脑Gpr173-1的表达,但Gpr173-2的表达受到显著抑制;而在脑垂体中,Gpr173-1和Gpr173-2 m RNA水平都显著降低。在E₂处理金钱鱼下丘脑原代细胞12h后,E₂显著促进Gpr173-1和Gpr173-2的表达。DHA、EPA和油酸处理金钱鱼下丘脑原代细胞,q PCR结果表明,DHA和EPA都显著提高Gpr173-1的表达,而油酸对Gpr173-1的表达无显著影响;EPA会显著抑制Gpr173-2的表达,DHA和油酸对Gpr173-2的表达无显著影响。油酸可显著促进Pnx表达,但DHA和EPA对Pnx的表达无显著影响。3.Gpr173介导Pnx调控的基因表达和信号途径首先采用双荧光报告系统分析Pnx激活其受体Gpr173下游信号通路表达的影响,然后使用抑制剂阻断调节通路加以验证。具体结果为,在Pnx激活其受体Gpr173-1下游信号通路的检测中,Pnx-14可以显著增强CRE启动子驱动的荧光素酶的活性,而且抑制c-fos和SRE启动子驱动的荧光素酶的活性;Pnx-20能够显著增强c-fos和SRE启动子驱动的荧光素酶的活性,对CRE启动子没有影响。在Pnx激活其受体Gpr173-2下游信号通路的检测中,Pnx-14可以显著增强c-fos启动子驱动的荧光素酶的活性,对CRE和SRE启动子没有影响;Pnx-20可以显著增强SRE启动子驱动的荧光素酶的活性,对c-fos和CRE启动子没有影响。q PCR结果表明,Pnx-14处理下丘脑原代细胞3h后,Gpr173-1无显著变化;处理6h后,Pnx-14能够显著促进Gpr173-1表达,而在加入PKA抑制剂H89后,Pnx-14促进Gpr173-1的表达受到抑制。Pnx-14处理下丘脑原代细胞3h后,Gpr173-2无显著变化,但加入抑制剂H89后,显著抑制Gpr173-2的表达;处理6h后,各组间无显著变化。并且Pnx-14处理3h后可以显著抑制sb Gn RH和Gn RHR表达,在加入抑制剂H89后,Pnx-14抑制的sb Gn RH和Gn RHR的表达被阻断,sb Gn RH和Gn RHR的表达量显著升高;处理6h后,各组间无显著性变化。综合上述结果,在金钱鱼中,Pnx-14可通过c AMP/PKA途径激活Gpr173-1,调控下游sb Gn RH和Gn RHR等生殖相关基因,参与金钱鱼的生殖调控。另外Pnx和Gpr173会受到DHA、EPA和油酸等潜在因子的调节,表明这两者与营养水平对生殖的调控有关。