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研究目的:本研究旨在观察益气养阴活血化痰方(YHF)对颈动脉粥样硬化斑块的临床疗效,益气养阴活血化痰方对ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化炎症反应的改善作用及对LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞炎症的抑制作用,并从TLR4/MyD88/NF-KB通路探讨其改善炎症反应的效应机制。研究方法:临床试验,选择符合诊断标准的老年颈动脉粥样硬化患者60例,采用随机、单盲、平行对照法分为两组,在常规西药干预的基础上,治疗组联合益气养阴活血化痰方,对照组联合阿托伐他汀钙片,疗程为6个月。记录并分析患者治疗前后血脂情况、炎症因子比较、动脉内膜厚度比较、中医证候积分、中医证候疗效比较。体内实验,以高脂饮食喂养ApoE-/-小鼠建立AS模型,成模后随机分为模型组(MOD),阿托伐他汀组(ATO),低剂量益气养阴活血化痰方组(LYHF),高剂量益气养阴活血化痰方组(HYHF),干预12周后,检测小鼠体重、血脂;油红染色观察ApoE-/-小鼠主动脉脂质沉积;qPCR法检测TLR4、MyD88、NF-κB和ICAM-1mRNA表达;免疫组化法检测小鼠主动脉TLR4的表达;ELISA法检测小鼠血清中TNF-α、IL-6和IL-1β炎症水平;Western blot 法检测 NF-κB、MyD88、TNF-α、TLR4、MCP-1 等蛋白的表达。体外实验,利用脂多糖(LPS)诱导RAW264.7巨噬细胞建立细胞炎症损伤模型,并将培养的细胞分为6组:正常对照组(CON),模型组(MOD),阿托伐他汀组(ATO),低剂量益气养阴活血化痰方组(LYHF),中剂量益气养阴活血化痰方组(MYHF),高剂量益气养阴活血化痰方组(HYHF)。加药干预后24小时收集细胞及上清液。ELISA法检测细胞上清TNF-α、IL-6和IL-1β炎症水平;提取各组细胞的总RNA,利用qPCR法检测各组细胞中炎症因子TLR4、MyD88、NF-κB、TNF-α mRNA表达,Western blot法检测TLR4、MyD88、NF-κB蛋白的表达。研究结果:临床试验,益气养阴活血化痰方可以改善老年颈动脉粥样硬化患者血脂水平(P<0.05),减少颈动脉内膜中层厚度,降低斑块厚度(P<0.05),降低炎性反应(P<0.05),改善动脉粥样硬化患者的中医症候积分(P<0.05),安全性良好。体内实验,与MOD组相比,YHF组小鼠TG、TC、LDL-c水平明显降低(P<0.05),HDL-c水平则较模型组显著升高(P<0.05),提示YHF能明显改善高脂诱导的ApoE-/-小鼠的脂代谢;与MOD组相比,ATO和YHF均显著减少了主动脉中的脂质沉积。油红染色显示,MOD组小鼠主动脉内皮可见明显脂质沉积,YHF及ATO干预后明显改善。血清ELISA检测结果显示与MOD组相比,YHF干预组TNF-α、IL-1β和IL-6相关炎症水平明显降低(P<0.05)。免疫组化结果显示,MOD组TLR4的蛋白表达升高,YHF干预后蛋白表达水平下降。Western blot结果提示,MOD组的NF-κB、MyD88、TNF-α、TLR4、MCP-1表达升高,在YHF干预后被显著抑制(P<0.05)。qPCR结果提示,MOD组的TLR4、MyD88、NF-κB和ICAM-1mRNA表达升高,在YHF干预后被显著抑制(P<0.05)。体外实验,LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞炎症损伤模型,可见细胞炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6水平明显升高(P<0.05),在以ATO和YHF处理24小时后,可见细胞炎症因子 TNF-α、IL-1β、IL-6 水平降低(P<0.05)。Western blot 结果提示,MOD 组的 NF-κB、MyD88、TLR4表达升高,在YHF干预后被显著抑制(P<0.05)。qPCR结果提示,MOD组的TLR4、MyD88、NF-κB、TNF-αmRNA表达升高,在YHF干预后被显著抑制(P<0.05)。研究结论:1.益气养阴活血化痰方可以改善老年颈动脉粥样硬化患者血脂水平;降低炎性反应;减少颈动脉内膜中层厚度,降低斑块厚度;临床疗效显著,无不良反应。2.益气养阴活血化痰方可以调节高脂饮食诱导的Apo-/-小鼠AS模型血清脂质水平,减少主动脉中的脂质沉积,抑制炎症细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6、MCP-1等的水平,抑制NF-κB、MyD88、TNF-α、TLR4、MCP-1等蛋白的表达,益气养阴活血化痰方通过抑制TLR4/MyD88/NF-KB通路的激活发挥抗动脉粥样硬化的炎症反应。3.益气养阴活血化痰方能抑制LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞炎症模型的炎症因子TNF-α、IL-6、IL-1β水平及TLR4、MyD88、NF-κB的表达,与体内实验结果相一致。益气养阴活血化痰方通过抑制TLR4/MyD88/NF-κB通路的激活抑制RAW264.7巨噬细胞炎症反应。