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目的:探讨乳腺癌新辅助化疗方案及疗效与化疗前后TOPⅡ表达的关系。
方法:
1、病例选取
选取中国医科大学附属一院乳腺外科自2005年8月至2010年9月收治的乳腺癌患者73例。所有病例均为女性,年龄25～68岁,中位年龄52岁。T2期42例,T3期27例,T4期4例:淋巴结阳性46例,阴性26例。浸润性导管癌72例,浸润性小叶癌1例。肿瘤最大径≥3cm,治疗前行双乳及肝胆脾彩超,X线照相检查,并且粗芯针穿刺明确病理诊断。
2、化疗方案
用4周期的多西他赛联合铂类或CEF方案作为新辅助化疗方案,具体用药:表柔比星60mg/m2,d1,静滴或多西他赛75mg/m2联合铂类150mg,d1,静滴;21d为1个周期。4周期化疗结束后休息2周行手术治疗。化疗期间予抗肿瘤支持治疗。化疗方案依据患者病理情况,身体情况,药物毒副反应,经济条件以及经患者同意后而确定的。
3、疗效评价标准
疗效按WHO制定的统一标准分为完全缓解(CR)、部分缓解(PR)、无变化(SD)和进展(PD)。完全缓解又分为病理完全缓解(pCR),临床完全缓解(cCR)。pCR定义为原发肿瘤及区域淋巴结均无残留浸润性癌细胞,其中残留原位癌也包括在pCR组。总有效率包括完全缓解和部分缓解。化疗前及化疗4周后均由高年资临床医师和超声医师根据病灶临床反映及B超测量肿瘤大小来评定疗效。
4、免疫组化方法
鼠抗人TOPⅡ单抗、免疫组化试剂盒购自福州迈新生物技术开发有限公司。治疗前粗芯针穿刺以及手术切除的乳腺肿瘤组织,4％中性甲醛溶液固定,常规石蜡包埋、切片,玻片孵育1 h,脱蜡至水化:二甲苯10 min,二甲苯10 min,100％酒精10 min,100％酒精10 min,95％酒精5 min,80％酒精5 min,75％酒精5 min,PBS冲洗3 min×3。3％H2O2室温孵育10 min以阻断内源性过氧化物酶:PBS冲洗3 min×3,于pH6.0的柠檬酸缓冲液中微波修复15 min,室温冷却20 min;以非免疫动物血清封闭10 min,PBS冲洗3 min×3,加一抗室温(24℃)孵育1 h,PBS冲洗3 min×3,加生物素标记的二抗,室温(24℃)10 min,PBS冲洗3 min×3,用辣根过氧化物酶标记的链霉素亲和素复合物孵育10 min,PBS冲洗3 min×3,DAB染色,苏木素复染1 min,脱水和透明:75％酒精5 min,8096酒精5 min,95％酒精5 min,100％酒精10 min,10096酒精10 min,二甲苯10 min,二甲苯10 min。树胶封片。以PBS代替一抗作为阴性对照,用试剂盒已知阳性片作阳性对照。
5、免疫组化结果判定
TOPⅡ阳性表达主要见于细胞核,呈清晰棕黄色或黄色弥漫性分布。由两位病理医师在不知患者临床和病理资料的情况下对免疫组织化学染色结果进行评定。每张切片随机观察10个高倍视野,核呈棕黄色的细胞数≥10％,定为TOPⅡ表达(+):＜1096定为TOPⅡ表达(一)。雌激素受体(ER),孕激素受体(PR),人类表皮生长因子受体2(CerbB-2)依据中国医科大学附属一院病理科病理报告,ER与PR分别分为(+)与(-)两组,CerbB-2表达(+)或(-)为一组,(++)～(+++)为一组。
结果:
1、TOPⅡ在乳腺癌中的阳性表达率为57.5％(42/73),其表达状况的分布与乳腺癌患者的年龄、肿瘤大小、淋巴结有无转移以及激素受体状态等临床病理变量无关。
2、73例患者中化疗总有效率67.1％,其中cCR占9.6％(7/73),PR占57.5％(42/73),SD占31.5％(23/73),PD占1.4％(1/73),术后病理确诊为pCR仅11例(15.1％)。
3、在TOPⅡ阳性表达者中78.6％(33/42)获得cCR或PR,高于TOPⅡ阴性表达者中51.6％(16/31)获得cCR或PR。36例应用蒽环类药物进行化疗,其中22例TOPⅡ阳性表达者中有18例(81.8％)获得cCR或PR,14例TOPⅡ阴性者中有5例(35.7％)获得cCR或PR。37例患者选用多西他赛药物治疗,其中20例TOPⅡ阳性表达者中有15例(75％)获得cCR或PR,17例TOPⅡ阴性者中有11例(64.7％)获得cCR或PR。
4、化疗前TOPⅡ阳性表达41例,阴性表达31例,经化疗后TOPⅡ表达由阳性转为阴性17例,阴性转为阳性10例,化疗前后TOPⅡ表达情况的差异具有统计学意义。另外进一步分析阳转阴者中获得pCR为35.3％(6/17),阴转阳或无变化者获得pCR为9.1％(5/55),两者比较差异具有统计学意义。
结论
1、TOPⅡ阳性与化疗疗效相关(特别是葸环类)可能成为预测其疗效的指标之一。
2、TOPⅡ阳转阴的患者更易获得pCR,TOPⅡ可能成为指导术后化疗方案选择的指标之一。