广西眼镜蛇毒L-氨基酸氧化酶的分离纯化及体内外抗血小板聚集实验

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目的:从广西眼镜蛇粗毒中分离纯化L-氨基酸氧化酶(L-aminoacidoxidase),并对其物理、生化性质及体内外抗血小板聚集作用进行研究。 方法:用Sephacryls-200凝胶过滤,DEAE-SepharoseCL-6B离子交换,CM-SepharoseCL-6B离子交换层析法分离纯化广西眼镜蛇毒中的L-氨基酸氧化酶,用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳在还原与非还原条件下测定其蛋白分子量,等电聚焦法测定等电点,比浊法测定广西眼镜蛇毒L-氨基酸氧化酶对二磷酸腺苷(ADP)、胶原、凝血酶、花生四烯酸(AA)引起的血小板聚集率的影响,双抗夹心放免法测定GMP-140含量,并观察血小板超微结构。 结果:从广西眼镜蛇毒中分离出的L-氨基酸氧化酶(L-aminoacidoxidase)分子量约为55.2KD,等电点为7.6;生物活性检测发现,该蛋白不具有磷脂酶A2和精氨酸酯酶活性,无纤溶及出血活性,能明显抑制二磷酸腺苷(ADP)、胶原、凝血酶、花生四烯酸(AA)引起的血小板聚集,并呈明显的正相关;明显降低凝血酶诱导的血浆GMP-140水平;减轻血小板超微结构的损伤程度。 结论:广西眼镜蛇毒L-氨基酸氧化酶能抑制体内外血小板聚集、释放功能,减轻血小板程度。
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