目的:天然免疫是机体抗病毒感染的第一道防线。近年来,相关研究证实泛素化及去泛素化修饰在机体天然免疫中发挥着重要作用。然而YOD1作为Otubain去泛素化酶家族重要成员之一,其在天然免疫中的研究相对较少。我们的研究旨在探究YOD1是否通过其去泛素化功能参与到抗病毒天然免疫反应中,并探明YOD1对MAVS介导的信号通路的调控作用,从而阐明YOD1在天然免疫中的调控机理,为细胞抗病毒反应提供了新的见解。方法:1.利用凝胶银染及质谱分析方法,筛选与MAVS具有相互作用的蛋白质分子;2.利用实时荧光定量PCR技术和Western Blot方法,检测在RNA病毒诱导下内源YOD1的m RNA和蛋白表达水平的变化,探究YOD1是否与细胞的抗病毒天然免疫相关;3.构建人源YOD1野生型及酶活突变体表达质粒,设计两对人源YOD1特异性小干扰RNA,在HEK293T细胞中检测YOD1对VSV-GFP病毒复制的影响,确定YOD1是否调控抗病毒免疫反应;4.利用实时荧光定量PCR技术和荧光素酶报告基因实验,检测YOD1对抗病毒干扰素及下游基因表达的调控作用,确定YOD1对抗病毒信号通路的影响;5.利用免疫共沉淀实验,确定YOD1是否与MAVS有相互作用,并找出二者相互作用的关键结构域;6.利用免疫荧光共定位实验和线粒体组分分离实验,确定YOD1与MAVS是否有空间上的共定位,并检测YOD1是否随着RNA病毒的感染发生迁移;7.利用Western Blot实验,检测YOD1是否对MAVS的泛素化修饰有所调控,并确定调控的泛素化类型;8.利用SDD-AGE实验,探究YOD1对MAVS激活过程中聚集体形成的影响。结果:MAVS蛋白是抗RNA病毒天然免疫反应中的关键接头蛋白。MAVS在激活过程中会发生K63位的泛素化修饰,并形成朊病毒样的聚集体,从而将信号传递给下游分子。我们的研究发现了一种属于卵巢肿瘤（OTU）家族的去泛素化酶YOD1,它可以对MAVS蛋白的活性进行负向调控。在机体受到RNA病毒感染后,去泛素化酶YOD1会被诱导表达,并逐渐招募到线粒体上,通过其Znf和UBX结构域与定位在线粒体上的MAVS蛋白进行相互作用。去泛素化酶YOD1去掉MAVS蛋白的K63位泛素化修饰,抑制MAVS形成朊病毒样聚集体,进而阻碍信号通路下游的IRF3和P65的激活,减少机体干扰素的产生,抑制机体抗病毒能力。相反,当抑制去泛素化酶YOD1的表达,可以促进IRF3和P65的激活,增加干扰素的产生,增强机体抗病毒反应。我们的研究结果,丰富了机体抗RNA病毒信号通路的调控作用,为细胞抗病毒反应调节提供了新的见解。结论:1.RNA病毒感染诱导YOD1表达增多。2.YOD1负调控MAVS介导的IFN-β信号通路激活。3.YOD1与MAVS相互作用。4.YOD1特异性移除MAVS的K63位泛素化修饰。5.YOD1阻碍MAVS朊病毒样多聚集形成。6.YOD1参与细胞的抗RNA病毒天然免疫反应。