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第一部分基于Wnt/β-catenin信号通路探究推拿对膝骨关节炎大鼠软骨降解和软骨细胞终末分化的影响目的观察推拿对膝骨关节炎大鼠关节软骨中wnt/β-catenin信号通路及其相关蛋白的影响,探讨推拿延缓膝骨关节炎关节软骨退变的潜在机制。方法将32只SPF级SD大鼠随机选取24只,采用4%木瓜蛋白酶0.2mL关节腔注射建立膝骨关节炎模型。造模后随机分为模型组8只、推拿组8只和阳性药物组8只,未造模的为对照组。推拿组予膝关节局部顺时针环形拇指揉法,纵向压力为3~5 N,频率控制为120~140次/min,15 min/次,最后屈伸关节10次。阳性药物组予塞来昔布24 mg·kg-1·d-1灌胃。各组干预1次/d,6 d/w,连续4 w。干预前后采用Lequesne MG评分评估大鼠膝骨关节炎功能障碍程度;HE染色法、番红O-固绿染色法观察膝关节软骨形态结构,改良Mankin评分进行关节软骨病理评分;ELISA检测血清Ⅱ型胶原C端肽(CTX-Ⅱ)和血清寡聚基质蛋白(COMP)含量;Western Blot法检测软骨组织Wnt信号蛋白4(Wnt4)、β-连环蛋白(β-catenin)、基质金属蛋白酶-13(MMP-13)、骨形态发生蛋白2(BMP-2)、癌基因c-myc的蛋白表达;免疫组化法检测关节软骨中软骨细胞X型胶原(Col X)的阳性表达率。结果与对照组相比,模型组大鼠关节软骨形态结构明显异常,Lequesne MG评分和改良Mankin评分显著上升(P<0.01),血清中的CTX-Ⅱ和COMP含量显著上升(P<0.01),软骨组织中Wnt4、β-catenin、MMP-13、BMP-2、c-myc的蛋白表达水平显著上升(P<0.01),关节软骨中软骨细胞Col X阳性表达率上升(P<0.01)。与模型组相比,推拿组和阳性药物组大鼠关节软骨形态结构改善,Lequesne MG评分和改良Mankin评分显著降低(P<0.01),血清中CTX-Ⅱ和COMP含量显著降低(P<0.01),软骨组织中Wnt4、β-catenin、MMP-13、BMP-2、c-myc的蛋白表达水平显著降低(P<0.01),关节软骨中软骨细胞COLX阳性率表达下降(P<0.01)。与阳性药物组相比,推拿组大鼠改良Mankin评分降低(P<0.05),血清中CTX-Ⅱ和COMP含量降低(P<0.05),软骨组织中Wnt4、β-catenin、MMP-13、BMP-2、c-myc的蛋白表达水平降低(P<0.05,P<0.01),关节软骨中软骨细胞COLX阳性率表达下降(P<0.01)。结论推拿可以减缓膝骨关节炎大鼠关节软骨的退变,其机制可能与通过下调Wnt/β-catenin信号通路,降低MMP-13、BMP-2和c-myc的蛋白表达,减少软骨细胞外基质降解、减缓细胞终末分化有关。第二部分电针对膝骨关节炎大鼠膝关节滑膜组织细胞焦亡的影响目的观察电针对膝骨关节炎大鼠膝关节滑膜组织中细胞焦亡相关蛋白的影响,探究电针治疗膝骨关节炎的潜在机制。方法将40只SPF级SD大鼠随机选取30只,采用4%木瓜蛋白酶0.2 mL关节腔注射建立膝骨关节炎模型。造模后随机分为模型组10只、电针组10只和阳性药物组10只,未造模的为对照组。电针组予膝关节“内膝眼”“犊鼻”电针治疗,15 min/次。阳性药物组予塞来昔布24mg·kg-1·d-1灌胃。各组干预1次/d,6 d/w,连续4 w。干预前后采用Lequesne MG评分评估大鼠膝骨关节炎功能障碍程度;HE染色法观察膝关节滑膜组织的形态学变化并进行滑膜炎病理评分;ELISA法检测血清白细胞介素(IL)-1β和IL-18的含量;免疫组化法观察膝关节滑膜组织中NOD样受体蛋白3(NLRP3)的表达;Western blot法检测膝关节滑膜组织中NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、Gasdermin D(GSDMD)、GSDMD-N、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1(caspase-1)、IL-1β、IL-18的蛋白表达;结果与对照组相比,模型组膝关节滑膜有明显炎症反应,Lequesne MG评分和滑膜病理评分显著上升(P<0.01),血清中IL-1β、IL-18的含量显著增加(P<0.01),NLRP3在滑膜内衬层和血管、炎性细胞中大量强阳性表达,滑膜组织中NLRP3、ASC、caspase-1、GSDMD、GSDMD-N、IL-1β、IL-18的蛋白表达水平显著升高(P<0.01)。与模型组相比,电针组和阳性药物组膝关节滑膜炎症反应轻,Lequesne MG评分和滑膜病理评分显著降低(P<0.01),血清中IL-1β、IL-18的含量显著降低(P<0.01),NLRP3在滑膜内衬层和血管、炎性细胞中少量中阳性表达,滑膜组织中NLRP3、ASC、GSDMD-N、caspase-1、IL-1β、IL-18的蛋白表达水平降低(P<0.01),阳性药物组滑膜组织中GSDMD的蛋白表达水平降低(P<0.05)。与阳性药物组相比,电针组大鼠血清中IL-1β、IL-18的含量升高(P<0.05),滑膜组织中IL-1β的蛋白表达水平显著升高(P<0.01)。结论电针可以减轻膝骨关节炎大鼠滑膜组织的炎症反应,其机制可能与通过下调NLRP3、ASC、caspase-1、GSDMD、GSDMD-N、IL-1β和IL-18的表达水平并减少滑膜组织中细胞焦亡的发生有关。