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研究目的:Nucleophosmin是一种多功能且普遍表达的核仁磷酸蛋白,主要定位于核仁,参与多种细胞生命活动,尤其对细胞的存活至关重要,已被证实在多种类型的癌症中有过度表达的现象。肝纤维化是由多种慢性刺激共同作用的肝脏疾病,其发病率和死亡率在全球有日益增高的趋势。但是目前有关肝纤维化发生的分子机制尚没有清楚的定论。本文以TGF-β刺激肝星状细胞活化,NPM与肝纤维化标志物ACTA2蛋白质表达量升高为切入点,在细胞水平上研究了 NPM在肝纤维化发展中的作用,并对NPM在肝纤维化进展作用的分子机制进行了初步探究。为探索有效的肝纤维化诊疗手段提供理论上的支持。方法:首先,通过促纤维化因子TGF-β刺激LX-2细胞,探究NPM在肝纤维化发展中的作用;其次,分别采用CRISPAR-Cas9和SiRNA技术对LX-2细胞内源性NPM表达进行敲除和沉默,通过Western blot和RT-qPCR技术进行验证;最后,分别利用NPM寡聚化抑制剂NSC348884和Akt磷酸化抑制剂MK2206作用LX-2细胞,验证NPM是否是通过Akt途径作用肝纤维化发展,其中还利用流式细胞仪技术检测了抑制剂对LX-2细胞活性氧、细胞周期和细胞凋亡的影响。结果:TGF-β刺激LX-2细胞激活肝星状细胞,NPM和肝纤维化标志物ACTA2的表达水平均升高,表明NPM有参与肝纤维化发生;TGF-β刺激LX-2细胞过程中,p-AKT蛋白质表达水平又升高的趋势;在敲除NPM表达的肝星状细胞中,ACTA2、Collagen Ⅰ和MMP9等肝纤维化标志物蛋白表达量明显下降,并且p-AKT/p-mTOR蛋白质表达水平也受到明显地抑制;NPM寡聚化抑制剂NSC348884和Akt磷酸化抑制剂MK2206作用LX-2细胞,在NPM的功能受抑制且表达量下降的同时,肝纤维化标志物ACTA2、CollagenⅠ和MMP9蛋白的表达量也出现降低的趋势;另外,TGF-β处理LX-2细胞5小时后,流式细胞仪检测细胞内活性氧水平有升高的现象,NSC348884和MK2206处理LX-2细胞5h后,活性氧的升高水平更为明显。结论:NPM参与肝星状细胞活化即肝纤维化中心事件的发生,并在肝纤维化发展中起促进作用;NPM的敲除或沉默表达,会抑制肝纤维化标志基因ACTA2、Collagen Ⅰ和MMP9的表达;NPM很可能通过Akt途径参与调控肝纤维化发展。