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肿瘤的转移是乳腺癌患者死亡的主要原因,而癌细胞的侵袭迁移是乳腺癌转移过程的重要步骤。癌细胞的迁移是一个复杂的生物学过程,涉及到多种信号通路和转录因子。目前已知有数百个基因与肿瘤的迁移相关,因而探索那些影响众多靶基因表达的关键性的调控基因是研究工作的重点。p300是乙酰转移酶家族的重要成员,广泛参与一系列基因的调控。据文献报道,p300在乳腺癌细胞中的高表达与乳腺癌的复发和不良预后存在相关性,但其具体的分子机制,特别是p300对乳腺癌细胞迁移的影响尚无报道。已有文献报道,MRTF-A对乳腺癌细胞迁移具有促进作用,基于此本课题对p300与MRTF-A对乳腺癌细胞迁移的影响及其机制展开了研究。本课题首先采用划痕实验探讨过表达p300对人乳腺癌细胞迁移的影响,结果显示p300可促进人乳腺癌细胞MCF-7和MDA-MB-231的迁移,同时分别采用RT-PCR、Real-time PCR、免疫印迹以及荧光素酶报告基因分析的方法检测到,p300促进了MCF-7细胞中迁移相关基因的转录和表达,且呈现出对p300有浓度依赖的关系;通过siRNA沉默技术干扰掉p300的表达后明显抑制了这两种癌细胞迁移,同样也抑制了 MCF-7细胞中迁移相关基因的转录和表达。进一步探索了p300和MRTF-A对人乳腺癌细胞迁移的协同作用。首先利用shRNA干扰MRTF-A在MCF-7细胞中的表达后,检测到迁移相关基因的转录和表达受到抑制,这与MRTF-A促进乳腺癌细胞迁移的报道是一致的。然后在MCF-7细胞中过表达p300和MRTF-A,分别采用RT-PCR、Real-time PCR、免疫印迹以及荧光素酶报告基因分析的方法检测了迁移相关基因的转录和表达在转染前后发生的变化。结果表明在转染及共转染p300和MRTF-A后迁移相关基因无论是转录水平还是蛋白水平都有明显的上调,且表现出明显的协同作用。最后研究了p300与MRTF-A协同促进乳腺癌细胞迁移的分子机制。首先通过蛋白质免疫共沉淀实验证明了 p300和MRTF-A能够发生直接的蛋白与蛋白相互作用,且p300与MRTF-A的C端TAD区域结合。其次,通过染色质免疫共沉淀技术证明了 p300与MRTF-A都能结合到迁移相关基因启动子区域的CArG元件上,过表达p300与MRTF-A提高了此处组蛋白的乙酰化水平,而二者的共表达使得组蛋白的乙酰化水平又进一步提升。综上所述,本课题的研究显示p300能够增强迁移相关基因的转录和表达从而促进乳腺癌细胞的迁移,并且p300与MRTF-A还具有协同作用,二者共同促进迁移进程。本研究结果一方面揭示p300促进乳腺癌转移可能是高表达p300的乳腺癌患者预后不良的原因之一,阐明了 p300高表达的病理学意义,拓展了对乳腺癌转移分子机制的认识;另—方面,提示利用RNAi干扰p300或MRTF-A的表达,从而抑制乳腺癌细胞的迁移,达到减少乳腺癌转移的抗癌效果,在乳腺癌治疗中将有广阔的应用前景。