提高纤维素利用效率的关键是对纤维素进行生物降解。生物降解具有条件温和、成本低廉、对环境无污染等优点。我们熟知的里氏木霉大量合成和分泌的胞外纤维素酶有60%是外切葡聚糖酶CBH Ⅰ,它能够从纤维素的还原末端连续催化形成纤维二糖,在对纤维素的降解过程中占主导地位。而黑曲霉所分泌的外切葡聚糖酶活力活力相对较低但内切葡聚糖酶和p-葡萄糖苷酶活力较高。为得到纤维素酶总体酶活水平不高的菌株,本文以里氏木霉外切葡聚糖酶的cbh1基因构建了重组表达质粒pPTRⅡ-cbh1,通过PEG-CaCl2介导转化黑曲霉Y14,构建工程菌,可望提高纤维素酶的总体活力。主要试验结果如下：1.黑曲霉Y14在第5天时所产纤维素酶的酶力活达到最高,即内切葡聚糖酶活力为23.40U/mL,外切葡聚糖酶活力为19.88U/mL,β-葡萄糖苷酶活力为87.20U/mL,滤纸最高酶活为27.01U/mL;由此可知,p-葡萄糖苷酶相对较高,而外切葡聚糖酶活力表现不高,总酶活也不高。2.黑曲霉Y14原生质体制备的最佳条件为：培养温度30℃,培养方式为300r/min高速震荡培养,培养时间(菌龄)16h,裂解液为1%蜗牛酶+0.1%溶壁酶十1%纤维素酶,渗透压稳定剂为1.0mol/L山梨醇,裂解时间为2h。3.以PUC118-cbh1作为模板,PCR扩增出cbhl目的片段,再与pPTRⅡ连接,转化大肠杆菌JM109,通过酶切和测序鉴定,确定载体中连入了正确的目的基因cbhl,并成功的构建了穿梭质粒pPTRⅡ-cbh1。4.利用PEG-CaCl2介导的转化法将pPTRⅡ-cbh1转入黑曲霉Y14原生质体中,以0.1μg/mL吡啶硫胺素作为筛选标记筛选转化子,并对转化子进行PCR鉴定,确定其转化子中含有目的基因。5.测得转化子外切葡聚糖酶活力及滤纸总酶活力均在第4天达到最高,分别为31.91U/mL和40.98U/mL,分别提高了1.61倍和1.52倍。