食源性致病菌一直以来都通过影响食品的安全来危害着人类的健康。近年来,食品安全事件的反复出现,这不仅在一定程度上威胁着人们的生活和工作等,更是与国家未来长足发展有着密切关系的事情。细菌性食物中毒是目前食源性疾病发生的主要原因,其中,由于弯曲杆菌引发的感染较多,而空肠弯曲菌(Campylobacter jejuni,C.jejuni)最为严重。在对其的检测问题上,已经建立的此类致病菌检测技术存在着许多困难,并不能完全适用于如今的检测研究。因此,建立一种检测C.jejuni新型的检测方法在当下就变得刻不容缓了。普通PCR方法能在很短的时间里对目标物实现指数增长,在较大的程度上提升灵敏度;并且免疫层析法也很容易制作,成本低且能实现灵敏快速检测正被广泛用于各种食品的检测中。本研究正是结合了普通PCR和免疫层析技术建立的一种新方法,成功地完成了C.jejuni的低检测限、高特异性及简便快速的检测。(1)基于单一的PCR技术的C.jejuni毒力基因同时检测方法的建立。本章实验通过查阅资料,设计了C.jejuni的保守序列mapA和毒力基因cdtB的特异性引物,再结合C.jejuni的模板DNA利用PCR进行扩增,最后对扩增产物通过琼脂糖凝胶电泳表征验证,建立了一种检测C.jejuni的高灵敏度且高特异性的新方法。实验过程中通过对用于PCR扩增的样品的制备过程中模板DNA的提取条件,PCR扩增中退火温度、引物浓度、镁离子浓度等的优化后,最终的检测结果可知,本方法达到的检测限是1.1×10~2 CFU/mL,经反复验证结果一直非常稳定。(2)基于胶体金标记的C.jejuni毒力基因检测试纸条的制备及其在牛奶样品中的应用。本章基于上一章PCR的基础上,并在mapA和cdtB的上下游引物分别修饰地高辛和Biotin及地高辛和FITC,主要得到两端带有地高辛和Biotin及地高辛和FITC的两种双链核酸分子,利用夹心法将目标物捕获在试纸条上,最终通过观察试纸条上显线情况而建立的一种C.jejuni快速检测方法。本实验对金标抗体最适量、最适封闭剂及最佳重悬液配方等进行了探索,完成了空肠弯曲菌的11CFU/mL的检测,同时相比较上章的最终实验结果,灵敏度提升了约10倍。且通过对掺杂牛奶样的鉴定,最终的检测结果可知,本实验建立的C.jejuni检测方法在食品安全的控制和检测中有着重要的应用前景。(3)基于量子点标记的C.jejuni毒力基因检测试纸条的制备及其在食品检测中的应用。本章是在上一章的基础上,将标记物换为颜色种类多的量子点,实验对检测过程中的量子点标记的最佳抗体量、封闭液、重悬液配方、检测稀释液pH等进行了优化,建立了一种利用量子点表现出的不同颜色来取代发出单一颜色的胶体金的荧光试纸条的检测新方法,旨在通过比较颜色不同来识别C.jejuni及其毒力性是否存在。实验结果表明,C.jejuni的标志性因子mapA及其毒力性的鉴定因子cdtB均可检测到11 CFU/mL,特异性较好,在食品的监控上都有一定的适用市场。