论文部分内容阅读
目的:探究“逆针法”对人体30h完全睡眠剥夺后的干预效应,观察30h完全睡眠剥夺期间认知状态、工作记忆、注意力的改变情况,与疲劳、嗜睡状态的内在效应关系,分析人体血浆样本中认知相关差异蛋白及富集通路变化情况,探索预防性针刺干预睡眠剥夺后认知功能下降的蛋白效应机制。方法:1.被试基线期指标评估:观察逆针法经穴组、逆针法非经穴组、模型组三组被试基线期内年龄、体温、身高、体质量、BMI、血压、呼吸、静息心率、每日睡眠时间、TPF睡眠评分的差异。2.“逆针法”对完全睡眠剥夺30h（TSD30h）认知状态、工作记忆、注意力的影响研究:采用斯特鲁普色词测验（Stroop）、Nback范式、数字符号转换实验（DST）评估经穴组、非经穴组、模型组三组在不同时间节点认知状态、工作记忆、注意力的改变情况。3.观察三组被试在多个不同时间节点脑缺血缺氧程度、疲劳程度、兴奋抑制程度及简易疲劳量表（BFI）、斯坦福嗜睡量表（SSS）、疲劳严重度量表（FSS）评分情况的差异,探讨疲劳、嗜睡状态与认知相关水平的临床效应联系。4.“逆针法”对TSD30h蛋白表达情况的影响研究:利用全新“4D Label-free”蛋白组学检测技术分析人体血浆中差异蛋白表达情况,使用KEGG、GO等数据库对其生物进程、分子功能等进行检测,并进行蛋白功能富集分析。对人体血浆样本中差异蛋白富集情况分析,探讨“逆针法”产生临床效应的物质基础与分子机制。结果:1.“逆针法”对TSD30h认知功能影响的研究:认知状态方面,基线期三组被试比较结果显示,代表Stroop中性条件的色词A、代表Stroop一致性条件的色词B和代表Stroop冲突条件的色词C、色词C`的反应时和误反应结果无显著性差异（p＞0.05）;事后比较同样显示各组间结果无显著性差异,具有可比性。睡眠剥夺15h（SD15h）三组比较结果显示,被试误反应次数出现明显变化,色词C、色词C`误反应有显著性差异,具有统计学意义（p＜0.05）;事后比较显示:色词C,色词C`逆针法经穴组误反应次数均明显少于另外两组,差异具有统计学意义（p＜0.05）。TSD30h三组比较结果显示,色词A反应时有显著性差异,色词C`反应时有显著性差异,差异均具有统计学意义（p＜0.05）;事后比较显示:各组测试者在色词A,色词B,色词C,色词C`测试中,反应时大多出现显著性差异,具有统计学意义（p＜0.05）。工作记忆方面,基线期三组比较结果显示,1-back和2-back的反应时和准确率结果无显著性差异（p＞0.05）,具有可比性;事后比较显示:各组反应时和准确率结果均无显著性差异（p＞0.05）,具有可比性。SD15h三组比较结果显示,1-back和2-back的反应时和准确率结果无显著性差异（p＞0.05）;事后比较显示:三个组别反应时和准确率结果均无显著性差异。TSD30h三组比较结果显示,三组1-back反应时有显著性差异,具有统计学意义（p＜0.05）;事后比较显示:TSD30h逆针法经穴组与另外两组的1back和2back反应时均有显著性差异,具有统计学意义（p＜0.05）。恢复期24h三组比较结果显示,1-back和2-back反应时和准确率结果无显著性差异（p＞0.05）;事后比较显示:逆针法经穴组与另外两组反应时和准确率结果均无显著性差异（p＞0.05）。注意力方面,基线期三组比较结果显示,DST分值无显著性差异（p＞0.05）,具有可比性;SD15h后逆针法经穴组与另外两组相比,DST分值分别具有显著性差异,具有统计学意义（p＜0.05）。TSD30h三组比较结果显示,三组DST分值有显著性差异,具有统计学意义（p＜0.05）;恢复期24h三组比较结果显示,DST分值结果无显著性差异（p＞0.05）。2.“逆针法”对TSD30h后疲劳及嗜睡状态影响的研究:TSD30h后,模型组脑部缺血缺氧值、疲劳值较基线值均显著升高（p＜0.05）,脑部兴奋抑制值显著降低（p＜0.05）。经穴组相较于非经穴组缺血缺氧值、脑部疲劳值显著降低（p＜0.05）,脑部兴奋抑制值显著升高（p＜0.05）。模型组BFI、FSS、SSS量表分值相较于基线显著升高（p＜0.05）。经穴组相较于模型组BFI、FSS分值显著降低（均p＜0.05）。经穴组相较于非经穴组FSS分值降低（p＜0.05）。3.人体血浆差异蛋白筛选鉴定到1563个可定量的蛋白质。TSD30h前后对比,认知相关的蛋白数量比较:模型组164个,非经穴组177个,经穴组241个。经穴组与模型组比较,有166个蛋白存在差异;非经穴组与模型组比较,有163个蛋白存在差异;非经穴组与经穴组比较,有44个蛋白存在差异。富集到9个关键蛋白质,其中BACE1个蛋白与认知功能密切相关。经穴组TSD30h前后差异蛋白富集到22条通路,2条与认知功能密切相关;模型组13条通路,6条与认知功能密切相关;非经穴组5条通路,1条与认知功能密切相关;整体对三组被试蛋白功能分析和通路富集分析发现AMPK信号通路、PPAR信号通路与“逆针法”针刺经穴产生认知功能的临床干预效应有直接作用。结论:1.“逆针法”可有效降低TSD30h后引发的认知功能下降、工作记忆下降、执行能力降低、脑抑制状态等不良反应的发生程度,具有良性调节作用。2.“逆针法”可有效改善TSD30h引起的疲劳、嗜睡状态,具体表现为升高脑部缺血缺氧、脑部疲劳程度、抑制状态,减弱脑部兴奋性减弱等。3.从蛋白质组学角度分析,证实了健康人体TSD30h后,AMPK、PPAR等通路内差异关键蛋白发生显著改变。“逆针法”对认知相关的关键蛋白表达及AMPK-PPAR-BACE1通路具有良性双向调节作用。4.“逆针法”对睡眠剥夺后受试者者血浆中BACE1表达有良好的调节作用,可通过有效降低人体血浆中BACE1表达异常,缓解睡眠剥夺后因BACE1表达异常升高所导致的认知功能下降。