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[背景]乳腺癌是我国女性最常见的恶性肿瘤之一,其严重威胁着我国女性的身体健康,目前乳腺癌发病率已升至女性恶性肿瘤第一位。据统计,2015年我国乳腺癌新发病例数约为30.4万例,发病率为45.29/10万,位居我国女性肿瘤首位。就区域而言,与农村相比,城市中乳腺癌的发病率较高,约54.32/10万,而农村仅为33.64/10万。在雌激素受体（estrogen receptor,ER）阳性、孕激素受体（progesteronereceptor,PR）阳性乳腺癌患者中,激素水平与乳腺癌的发生发展密切相关。雌激素受调节剂他莫昔芬（tamoxifen,TAM）在乳腺癌内分泌治疗中广泛应用,孕激素受体的状态是否影响了他莫昔芬在乳腺癌中的治疗效果存在争议,在乳腺癌内分泌治疗中发挥着一种什么样的作用有待进一步研究和探讨。基于PR状态是否影响了乳腺癌内分泌治疗中他莫昔芬的治疗效果,本实验利用慢病毒转染的方法敲低MCF-7乳腺癌细胞中PR基因的表达得到ER+PR-MCF-7乳腺癌细胞,并制作乳腺癌异种移植瘤模型,观察他莫昔芬在各裸鼠移植瘤中的治疗效果。利用平板克隆实验检测细胞的克隆形成能力进而评估各组细胞的增殖能力,利用蛋白质免疫印迹技术（Western Blotting,WB）检测孕激素受体与表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor,EGFR）、雷帕霉素靶蛋白（mammalian target of rapamycin,mTOR）的相关性。[目的]探讨敲低ER+PR+MCF-7乳腺癌细胞PR基因表达后TAM对ER+PR-细胞及ER+PR-移植瘤生长的影响及敲低PR表达后EGFR、mTOR蛋白表达水平的变化。[方法]1.设计敲低PR表达的一条短发夹RNA（short hairpin RNA,shRNA）和一条阴性对照序列分别构建入慢病毒载体后进行体外的病毒包装,以乳腺癌细胞MCF-7为靶标,将包装成功的病毒颗粒感染MCF-7细胞,用qPCR和WB检测是否实现PR基因在MCF-7细胞中的低表达。2.平板克隆实验检测 sh-PRTAM 组、sh-PR control 组、vector TAM 组、vector control组细胞的克隆形成能力进而评估各组细胞的增殖能力。3.动物体内实验建立ER（+）PR（+）HER2（-）、ER（+）PR（-）HER2（-）裸鼠皮下移植瘤模型:将ER+PR+MCF-7乳腺癌细胞（vector组细胞）和ER+PR-MCF-7乳腺癌细胞（PR shRNA组细胞）注射到裸鼠右侧腋下,建立乳腺癌裸鼠异位模型,体内研究PR对TAM治疗的影响。裸鼠被随机分为2组（每组10只）,sh-PR组、vector组,成瘤以后再将这两组各分为2组,即sh-PRTAM组、sh-PR control组、vector TAM组、vector control组,用药两周,期间测量移植瘤体积、裸鼠体重,用药2周后处死裸鼠,称取各组瘤体重量,评估抑瘤率。4.Western blot检测PR-shRNA组和vector组细胞中mTOR和EGFR蛋白的表达情况。5.统计学方法采用Graphpad Prism8.2、ImageJ软件及SPSS 22.0统计软件进行绘图及数据分析,计量资料采用均数±标准差（x±s）表示,统计学方法采用两独立样本t检验、单因素方差分析、LSD-t检验,P<0.05为差异有统计学意义。[结果]1.平板克隆实验结果显示:sh-PRTAM组、sh-PR control组、vector TAM组、vector control 组克隆集落形成的数目分别为 378.00±10.37,432.33±8.99,728.33±6.90,1141.67±8.12,vector control组克隆集落形成数较其他三组多,克隆形成能力强,敲低MCF-7乳腺癌细胞PR基因表达后,sh-PRTAM组、sh-PR control组细胞细胞克隆集落数减少,敲低PR基因抑制了细胞的克隆形成能力,sh-PR TAM组用TAM处理后,细胞的克隆形成能力与未予处理的sh-PR control组相比无明显差异,差异无统计学意义（P>0.05）,vector TAM组用TAM处理后,细胞克隆集落数较vectorcontrol组减少,差异有统计学意义（P<0.05）,Sh-PRTAM组细胞增殖能力较vector TAM组弱,差异具有统计学意义（P<0.05）,2.裸鼠体内实验显示,就移植瘤体积而言,给药后第15天时,sh-PRTAM组和 sh-PR control 组的平均肿瘤体积分别为（71.96±4.30）mm3、（64.63±8.56）mm3,vector TAM 组和 vector control 组的平均肿瘤体积分别为（107.42±10.60）mm3、（205.942±25.63）mm3。sh-PR control组移植瘤体积与sh-PR TAM组移植瘤体积相比,统计学无显著差异（P>0.05）,sh-PR control组的移植瘤体积小于vector control组,sh-PR TAM组移植瘤体积小于vector TAM组。3.就移植瘤瘤体重量而言,sh-PR TAM组和sh-PR control组瘤重分别为（0.03±0.007）g、（0.03±0.005）g,vector control 组和 vector TAM 组瘤重分别为（0.11±0.012）g、（0.06±0.003）g。sh-PR control 组肿瘤瘤重比 vector control 组小,vector control 组肿瘤瘤重比 vector TAM 组大,sh-PR control 组和 sh-PR TAM 组肿瘤瘤重无明显差异,sh-PR TAM组的瘤重比vector TAM组小。sh-PR TAM组的抑瘤率为72%,sh-PR control组的抑瘤率为72%,vector TAM组的抑瘤率为45%。4.Western blot结果显示,与vector组细胞相比,PR-shRNA组细胞的EGFR、mTOR蛋白表达水平增高,差异具有统计学意义（P<0.05）。5.慢病毒转染MCF-7乳腺癌细胞,qPCR和Western blot检测结果显示阳性序列shRNA组（PR-shRNA组）PR基因的mRNA和蛋白的相对表达量均明显低于空白组（control组）、阴性序列shRNA组（vector组）,它们之间具有统计学差异（P<0.05）[结论]1.体内外实验表明,MCF-7细胞中孕激素受体的敲低导致细胞在体内外的增殖速度减慢。2.敲低MCF-7乳腺癌细胞PR表达后,他莫昔芬对ER+PR-MCF-7细胞治疗效果降低,即孕激素受体影响TAM对ER+PR-细胞及移植瘤的治疗效果。3.敲低PR表达以后ER+PR-MCF-7细胞中EGFR、mTOR蛋白的表达水平增强,PR与EGFR、mTOR存在明显的负相关关系。4.通过慢病毒转染技术成功将PR-shRNA阳性序列转染入MCF-7乳腺癌细胞中,实现了 PR基因在MCF-7细胞中的低表达。