论文部分内容阅读
集约化的养殖导致家兔消化道疾病多发,死亡率高现象频频发生,随着抗生素的禁用,研发一种新型绿色安全的饲料添加剂成为研究热点。乳酸菌在畜禽中应用最为广泛,且研究表明来源于同种动物肠道的菌株对畜禽的积极作用远大于异源菌株。因此本试验旨在筛选出一株优良的兔源乳酸菌,并探究其对肉兔生长性能、肉品质、肠道微生物多样性的影响,以及通过建立LPS诱导应激模型探究其对肉兔组织损伤、免疫和抗氧化方面的影响,为兔源乳酸菌的应用奠定基础。试验结果如下:试验一:兔源乳酸菌的分离鉴定与生物学特性选取生长性能优良的成年家兔（30例）,分离盲肠内容物作为出发菌源,以产酸效率和抑菌性能作为评价标准进行筛选,最终筛选出目的菌株LC-6-2,通过对菌落及菌体的形态学观察结合生化及分子生物学鉴定,最终确定该菌株为乳酸片球菌。通过测定该菌的生物学特性发现,该菌株在液体培养条件下6h达到对数期,在20h达到稳定期（菌体浓度为5.3 × 109CFU/g）,产酸性能在培养48h后pH值为3.98,体外抑菌试验对大肠杆菌、沙门氏菌、奇异乳杆菌和金黄色葡萄球菌等致病菌有较好的抑制效果,且未发现有溶血反应。综合分析该菌株是一株有潜力作为优良益生菌制剂的菌株。试验二:兔源乳酸片球菌对肉兔生长性能、血清生化指标、肉品质及肠道菌群的影响选取健康、体重相近（1.37±0.09 kg）的42日龄肉兔72只随机分为3个处理组,每组6个重复,每个重复4只,单笼饲养。CON组饲喂基础日粮,AB组、PA组分别在基础日粮中添加15 μg/g金霉素、5×106 CFU/g乳酸片球菌。预饲期7d,正式期28 d。1)与CON组、AB组相比,PA组料重比极显著降低（P<0.01）;2)PA组的总蛋白含量较CON组、AB组分别显著提高1.93%（P>0.05）、5.51%（P<0.01）;与PA组比,AB组尿素氮含量降低了 14.06%（P<0.05）;与CON组比,PA组甘油三酯、总胆固醇呈降低趋势,与AB组均无显著差异（P>0.05）;3)PA 组肉色 L 值较 CON 组、AB 组分别提高了 2.35%（P>0.05）、14.68%（P<0.01）,与CON组、AB组比,PA组滴水损失、蒸煮损失均呈降低趋势（P>0.05）;与CON组、AB组相比,PA组肌纤维直径最小;肌间脂肪沉积增多,但各组间无显著差异（P＞0.05）;4)与CON组、AB 比,PA组各肠段pH呈降低趋势;5)与CON组、AB组比,PA组空肠胰蛋白酶、脂肪酶活性活性均显著提高了（P<0.01）。6)各组间总挥发性脂肪酸（TVFA）、乙酸、丁酸含量无显著差异（P>0.05）,但与CON组、AB组相比,PA组的TVFA、乙酸、丁酸含量呈上升趋势;7)PA组空肠绒毛高度与CON组、AB组均无显著差异（P>0.05）。与CON组比,PA组空肠隐窝深度显著降低7.48%（P<0.05）、绒隐比显著提高了 8.06%（P<0.01）;与AB组比,PA组回肠绒毛高度、绒隐比分别显著提高了 3.63%、5.46%（P<0.05）;8)各试验组间在盲肠微生物多样性上存在差异（P<0.05）。添加PA物种丰度和多样性有升高趋势,瘤胃球菌科、毛螺菌科未分类菌属和红椿杆菌科相对丰度均以PA组最高,与CON组、AB组存在极显著差异（P<0.01）;拟杆菌门以PA组最低,与其余两组存在显著差异（P<0.05）。试验三:兔源乳酸片球菌对脂多糖刺激条件下肉兔组织损伤、抗氧化性能和免疫的影响在试验二的基础上,将肉兔随机分成4组,每组8只,单笼饲养,CON与LPS组饲喂基础日粮,LPS+AB与LPS+PA组与试验二日粮一致,LPS、LPS+AB组、LPS+PA组分别在第28 d和31 d按照每只兔子200μg/kg BW剂量腹腔注射LPS,CON组注射等量0.9%生理盐水,第35 d麻醉、屠宰。1)LPS组空肠绒毛高度较CON组显著降低（P<0.01）,LPS+AB组与LPS+PA组间无差异（P>0.05）;LPS组空肠、回肠隐窝深度、绒隐比与其余三组组均存在显著差异（P<0.05）,CON 组、LPS+AB 组、LPS+PA 组间无显著差异（P>0.01）,LPS组空肠、回肠肠壁厚度较其他三组均显著降低（P<0.01）;2)经LPS应激处理后,与CON组比,LPS组、LPS+AB组和LPS+PA组中回肠上皮杯状细胞数量分别增加 21.70%（P<0.01）、8.13%（P>0.01）和 13.47%（P>0.05）,但LPS+AB组和LPS+PA组杯状细胞数显著低于LPS组（P>0.05）;3)LPS组血清中ALT、AST含量比CON组、LPS+AB组、LPS+PA组显著提高（P<0.01）,与LPS组比,PA+LPS组明显改善了肝窦扩张情况,对肝脏起到保护作用;4)经LPS应激处理后,与CON组相比,LPS组、LPS+AB组、LPS+PA组血清中的 CRP 分别显著升高了 35.42%（P<0.05）、26.19%（P>0.05）、32.61%（P<0.05）;与 CON 组相比,LPS 组 IgA 含量提高了 8.80%（P<0.05）,LPS+AB 组与 LPS+PA 组呈降低趋势;与LPS组相比,LPS+AB组、LPS+PA组IgA含量均降低;与LPS组相比,CON组、LPS+AB组和LPS+PA组IgG含量显著降低（P<0.01）;5)与LPS组相比,LPS+AB组和LPS+PA组DAO含量分别降低了 1.69%、1.54%（P>0.05）;LPS+PA组血清CAT含量较LPS组提高但差异不显著（P>0.05）。与LPS组相比,LPS+AB组、LPS+PA组肝脏CAT含量分别提高了 17.24%（P>0.05）、26.15%（P<0.01）;血清和肝脏中LPS组MDA含量较其他组均显著提高（P<0.05）。综上所述,在肉兔日粮中添加乳酸片球菌,能够在一定程度上替代金霉素,提高肉兔生长性能,改善肉品质,增强盲肠微生物多样性;LPS应激导致肉兔组织受损、免疫力降低,添加乳酸片球菌后可提高肉兔血清、肝脏和肠粘膜抗氧化能力,提高机体生长性能和免疫力,减少肝损伤,改善肠道形态结构,促进肉兔肠道健康。