【摘 要】
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背景:靶向肿瘤细胞代谢的治疗方法是近年来的研究热点。研究表明糖酵解抑制剂可通过干预有氧糖酵解途径来抑制非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）的增殖。然而,有研究认为肿瘤细胞的线粒体氧化磷酸化（oxidative phosphorylation,OXPHOS）途径在肺癌的代谢上也发挥着重要作用,且肿瘤细胞可能通过有氧糖酵解和OXPHOS这两种途径之间的相互交
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背景:靶向肿瘤细胞代谢的治疗方法是近年来的研究热点。研究表明糖酵解抑制剂可通过干预有氧糖酵解途径来抑制非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）的增殖。然而,有研究认为肿瘤细胞的线粒体氧化磷酸化（oxidative phosphorylation,OXPHOS）途径在肺癌的代谢上也发挥着重要作用,且肿瘤细胞可能通过有氧糖酵解和OXPHOS这两种途径之间的相互交替来适应代谢的挑战。二甲双胍（Metformin,Met）是一种已知线粒体OXPHOS的抑制剂,研究发现其可以降低NSCLC发病率和死亡率。本研究将探讨Met和糖酵解抑制剂WZB117（WZB）联合使用对NSCLC的增殖影响及其可能的机制,为Met作为NSCLC辅助治疗策略的临床实践提供理论基础。目的:通过抑制NSCLC的有氧糖酵解和氧化磷酸化两种代谢途径,使用多种实验方法探究Met和WZB的联合应用对人非小细胞肺癌H1299细胞生长和增殖的影响及相关的作用机制,以期寻找更有效的靶向肺癌代谢途径的治疗方案,为临床治疗提供实验依据,为下一步研究提供参考和思路。方法:本研究以H1299细胞为研究对象,使用Met和WZB进行干预,探究其单独给药和联合给药对H1299细胞增殖、迁移能力的影响及可能的机制。本研究共分为4组:对照组、Met组、WZB组、Met和WZB联合处理组。测定指标如下:（1）CCK-8技术测定不同浓度Met（0 m M、1 m M、2.5 m M、5 m M、10 m M、15 m M和20 m M）和WZB（0μM、10μM、20μM、40μM和60μM）对H1299细胞增殖能力的影响,并计算其IC25和IC50。根据前面的研究结果,以IC25或IC50作为联合给药组的处理浓度,探究联合给药对H1299细胞增殖能力的影响,并与单独给药组进行比对。后续实验均以IC50浓度进行处理。（2）使用电子显微镜观察不同处理对H1299细胞生长状态和密度的影响。（3）实时荧光定量（RTq PCR）技术测定不同处理对H1299细胞葡萄糖转运相关基因（glucose transporter1,GLUT1）和细胞凋亡相关基因（BAX和BCL-2）表达的影响。（4）细胞划痕实验检测不同处理对H1299细胞迁移能力的影响。结果:（1）CCK-8实验结果显示,Met或WZB单独处理均可显著抑制H1299细胞的增殖能力（P＜0.01）,且呈明显的时间依赖性和浓度依赖性。Met和WZB联合处理可显著抑制H1299的增殖能力,且抑制作用显著高于两个单药处理组（P＜0.01）,说明两者具有协同作用。（2）Met、WZB或二者联合处理H1299细胞72小时后,与对照组相比较,处理组细胞出现不同程度的死亡,细胞密度明显降低。且与单药处理组相比较,联合处理组的细胞密度降低程度更大。（3）实时荧光定量检测H1299细胞相关基因的表达情况,结果显示,与对照组相比较,处理组BCL-2、GLUT1的表达量显著下调（P＜0.01）,BAX表达量上调（P＜0.01）;相较于单药处理组,联合处理组BCL-2、GLUT1的下调和BAX的上调更为显著。（4）细胞划痕实验显示,与对照组相比较,处理组H1299细胞的迁移能力显著下降（P＜0.01）,且联合处理对H1299细胞迁移能力的抑制作用更强。结论:（1）二甲双胍联合WZB协同抑制H1299细胞的生长,这种协同抑制作用可能与肿瘤细胞中的低糖环境有关。（2）联合给药组通过下调BCL-2和上调BAX来诱导更多的人非小细胞肺癌H1299细胞的凋亡,其机制可能是通过限制非小细胞肺癌的有氧糖酵解和线粒体氧化呼吸链,导致ATP浓度降低。（3）二甲双胍联合糖酵解抑制剂有望在临床上成为非小细胞肺癌新的辅助治疗策略。
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