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黄芩素是中药黄芩的重要活性成分,具有抗菌、抗病毒、抗炎、保肝利胆、利尿、抗癌等多种药理作用。黄芩素水溶性差,体内被快速代谢,口服生物利用度低,无法直接制成注射剂。目前,临床上没有以黄芩素为主要活性成分的制剂。目的:通过系统处方前研究,建立溶解度、含量及有关物质测定方法,考察药物理化性质,明确限制注射剂发展的关键因素。通过磷脂复合物研究,制备黄芩素中间载体,改变药物分散状态,改善药物溶解性等理化性质。在磷脂复合物研究基础上,通过水包油亚微乳设计,提高制剂载药量和稳定性,克服溶解度低和稳定性差对注射剂发展的限制。通过药代动力学和药效学评价,为开发安全、稳定、有效的黄芩素亚微乳注射剂奠定基础。方法:①处方前研究建立紫外分光光度法（UV）和高效液相色谱法（HPLC）,测定黄芩素在不同溶剂系统及不同pH值条件下的溶解度,考察溶液pH值对药物化学稳定性的影响。②磷脂复合物研究建立复合物含量及复合率测定方法。以复合率为指标,单因素考察反应溶剂、时间、温度、药物浓度以及药物与磷脂的比例对磷脂复合物制备结果的影响,筛选并优化制备条件;采用紫外光谱（UV）、红外光谱（IR）、差热分析（DSC）、X-射线衍射（XRD）和磷核磁共振(31P-NMR)等分析手段考察磷脂复合物的物相状态及光谱学特征,探讨药物与磷脂相互作用机理;测定磷脂复合物在水、正辛醇和大豆油中溶解度,评价复合物对药物理化性质的改善作用。③亚微乳剂研究将药物以磷脂复合物形式溶于大豆油中,采用高压均质法制备黄芩素亚微乳剂。以粒径、zeta电位、离心分层、灭菌稳定性等为优化指标,单因素考察乳化剂、稳定剂、制备工艺参数等对乳剂稳定性的影响;进一步通过正交设计优化亚微乳剂处方及制备工艺。建立乳剂含量、有关物质等质量控制方法,评价亚微乳剂质量可控性和长期储存稳定性。④亚微乳药代动力学研究以6-羟基黄酮为内标,建立HPLC体内分析方法,测定黄芩素及其代谢物黄芩苷的血药浓度。以黄芩素50%PEG400溶液为参比制剂,考察大鼠静脉注射亚微乳剂的药时曲线,计算主要药代动力学参数。⑤亚微乳药效学评价采用肺适应株流感病毒（FM1）感染的小鼠肺炎模型,设病毒对照组和病毒唑阳性对照药组,考察不同剂量亚微乳静脉注射后对小鼠肺脂数和死亡率/存活率的影响。结果:①处方前研究紫外分光度法吸光度A与药物浓度C线性方程为A=0.1002C+0.0005,r=0.9999,低、中、高浓度RSD均小于0.50%;高效液相色谱法峰面积A与药物浓度C线性方程为A=54.8090C-6.8836,r=0.9999,高、中、低浓度RSD均小于2.0%,定量限0.6 ng,检测限0.2 ng,主成分与降解产物及有关物质分离良好。黄芩素在水中解度为17.5μg/mL,大豆油中溶解度小于0.3mg/mL;水中溶解度随pH值上升有增加趋势,但在pH7.0以上极易发生降解。②磷脂复合物研究以四氢呋喃为溶剂、药物浓度60mg/mL、药物/磷脂=1:3.5（w/w）、室温反应0.5h,药物与磷脂可完全复合,平均复合率为101.1%。药物形成磷脂复合物后紫外光谱特征未发生改变,但红外光谱的特征吸收峰发生了位移,且强度有明显变化。磷脂复合物与磷脂的31P-NMR特征未发生改变,提示药物与磷脂并未形成新的化学键,两者系以弱于化学键的分子间作用力相结合。XRD衍射图中黄芩素晶体衍射峰消失,转变为无定形状态。磷脂复合物使药物在水中溶解度增加至142.3μg/mL,大豆油中溶解度提高至30mg/mL以上。③亚微乳剂处方及制备工艺研究乳化剂配比和用量、高压均质压力和次数、充氮等条件均可影响乳剂制备结果,膜过滤、灭菌方式对乳剂影响很小,油酸对乳剂稳定性无明显改善作用。以大豆油为油相（油相比例20%）,S75/F68=3:5为乳化剂（用量3.2%）,甘油2.5%,高压均质压力控制在800Bar,均质5次,充氮密封,经121℃热压灭菌15min,可制得粒径分布均匀、平均粒径139nm、zeta电位-22.40mv、pH为5.83的黄芩素亚微乳剂。经室温和4℃放置6个月,乳剂外观、pH值、含量和有关物质均未发生明显变化,质量稳定。④体内药代动力学研究在建立的色谱条件下,内源性物质、内标物、原形药黄芩素及主要代谢产物黄芩苷均达基线分离;黄芩素和黄芩苷在0.06～48.0μg/mL浓度范围内线性关系良好;两者血浆最低检测浓度均为0.02μg/mL;黄芩素日内精密度RSD为0.4%～1.1%、日间RSD为0.8%～16.2%、方法回收率为98.97%～104.71%、提取回收率为73.71%～84.26%;黄芩苷日内精密度RSD为0.2%～3.9%、日间RSD为0.7%～15.3%、方法回收率为95.47%～105.27%、提取回收率为69.95%～75.38%。大鼠尾静脉注射亚微乳剂和50%PEG400溶液,黄芩素体内药时曲线均符合二室模型,t1/2β分别为16.30min和10.88min,AUC分别为90.51（μg/mL）·min和62.57（μg/mL）·min。黄芩素在体内快速转化为代谢产物黄芩苷,50%PEG溶液给药后30min和亚微乳给药后60min几乎检测不到黄芩素,但10小时仍能检测到代谢产物黄芩苷。⑤药效学研究与病毒对照组比较,10mg/kg、20mg/kg和30mg/kg亚微乳受试组对肺炎小鼠的肺指数和死亡率的降低均具有显著性意义,中、高剂量组P＜0.01,小剂量组可显著降低动物的死亡率。结论:水中溶解度低和化学稳定性差限制了普通注射剂的研究,油中溶解度低限制了亚微乳的制备。磷脂复合物可改变药物分散状态,显著提高药物在油中溶解度。以磷脂复合物为中间载体,可显著增加油相中药物浓度和制剂载药量,提高亚微乳耐高温灭菌能力和长期贮存稳定性。药物形成磷脂复合物后再包封于油相中形成水包油亚微乳,可延缓药物在体内的代谢,降低表观消除速率,提高原形药的血药浓度和生物利用度。黄芩素亚微乳注射剂对肺适应株流感病毒（FM1）致小鼠肺炎有显著治疗效果,具有良好的开发前景。