【摘 要】
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目的:研究NGF和BDNF基因分别和共转染大鼠骨髓基质干细胞（MSCs）,对其不同的诱导分化作用,以及MSCs作为种子细胞对缺氧凋亡的神经胶质细胞的保护作用,探讨MSCs和星形胶质细胞的最佳培养条件、神经营养因子对MSCs的诱导分化和转染后MSCs神经保护机制。为治疗继发性神经损害和促进损伤的神经系统功能恢复提供新思路。 方法:采用密度梯度离心法分离SD大鼠的MSCs,作原代和传代培养,免疫
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目的:研究NGF和BDNF基因分别和共转染大鼠骨髓基质干细胞（MSCs）,对其不同的诱导分化作用,以及MSCs作为种子细胞对缺氧凋亡的神经胶质细胞的保护作用,探讨MSCs和星形胶质细胞的最佳培养条件、神经营养因子对MSCs的诱导分化和转染后MSCs神经保护机制。为治疗继发性神经损害和促进损伤的神经系统功能恢复提供新思路。 方法:采用密度梯度离心法分离SD大鼠的MSCs,作原代和传代培养,免疫细胞化学方法鉴定SH3抗原;在前期系列微基因构建的基础上,应用DNA室构建的含人Ⅰ型胶原基因调节元件（COLIAI）-NGF/BDNFcDNA微基因,碱裂解法提取pSVCEP-NGF-CAT、pSVCEP-BDNF-CAT和pSVCEP-CAT重组质粒DNA,分别经EcoRI/HindⅢ、SalⅠ/HindⅢ和HindⅢ/BamHI酶切图谱分析;经LipofectAMINETM介导转染传第一代（P1）MSCs,同时转染空载体pSVCEP-CAT作为阴性对照和pEGFP-C1用以观察转染效率;G418筛选阳性细胞克隆;直接法ELISA测定MSCs培养液中2天、2周和4周的NGF和BDNF;原位杂交法检测MSCs表达的NGF和BDNF;激光免疫共聚焦显微镜观测基因转染后MSCs表达的NGF、BDNF、Nestin、NF、NSE和GFAP。原代培养和纯化新生SD大鼠的神经星形胶质细胞,免疫细胞化学鉴定GFAP;缺氧24h诱导星形胶质细胞凋亡后,用NGF和BDNF转染的MSCs与之共培养1周和2周,免疫细胞化学观察Caspase-3和Fas的表达,流式细胞仪观测凋亡和坏死细胞的比例。
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