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二十碳五烯酸(EPA)和二十二碳六烯酸(DHA)是特征性多不饱和脂肪酸,具有重要的生理活性,已被广泛的应用在新药和保健食品中。传统的分离方法均不能有效地分离EPA和DHA,需多种方法结合使用。其中,结合柱层析法是最有效的。现有柱层析法多采用物理结合将Ag+接枝到硅胶表面,Ag+稳定性差,容易脱落,造成样品污染。本研究在传统柱层析分离EPA和DHA的基础上,以EPA(≥92%)和DHA(≥88%)为研究对象,EPA和DHA的分离度为考察指标,对Ag+、Cu+和Cu2+改性硅胶进行筛选,最终找到有效分离EPA和DHA的改性硅胶,并总结相应的色谱规律,为以后工业化生产提供技术指导。主要内容分为三部分:1.在Ag+、Cu+和Cu2+改性硅胶为固定相所制备的分析柱上(4.6×250 mm),以EPA和DHA的分离度为指标,对EPA和DHA的分离效果进行评价。结果表明,以γ-氯丙基三氯硅烷为媒介,将乙二胺接枝到硅胶微粒表面,制备得到乙二胺偶联接枝硅(EDA/Si02,粒径为10～40μm)即氨基硅胶,在进样量5μg,流速1mL/min,流动相为正己烷:异丙醇=1000:1时,可有效分离EPA和DHA,分离度为1.44。2.研究EDA/Si02对Ag+的吸附性能,并对EDA/Si02分离EPA和DHA进行条件优化。结果表明,在EDA/Si02与AgN03质量比为15:1,pH=6,反应时间T=25h的条件下制备的Ag+改性乙二胺偶联接枝硅胶最稳定,同时在流动相为正己烷:异丙醇=1500:1,流速为1 mL/min,样品浓度为1 mg/mLEPA和DHA混合液,进样5μL的条件下,EPA和DHA达到基线分离,分离度为1.50。3.在以市售通用色谱分析氨基硅胶(粒径为5 10 为固定相所制备的分析柱上,评价EPA和DHA在正相体系中的色谱保留行为,同时考察载银氨基硅胶的粒径和流动相对其分离的影响。结果表明,5 μm的载银氨基硅胶的分离度是1.87比10 μm的0.80好,而且EPA和DHA的分离度,随着流动相中正己烷溶剂的增大而增大。当流动相为正己烷:异丁醇=2000:1,进样量为5 μg时,EPA和DHA分离度最佳,分离度为 2.03。