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本研究比较了不同产地C.lentillifera的营养成分;利用单因素和响应面实验优化了长茎葡萄蕨藻多糖（Caulerpa lentillifera polysaccharide,CLP）的提取工艺;分离纯化出具有免疫刺激活性的长茎葡萄蕨藻多糖P1（Caulerpa lentillifera polysaccharide-P1,CLP-P1）,采用甲基化、核磁共振（Nuclear magnetic resonance,NMR）等技术鉴定了其结构信息;采用ELISA、流式细胞仪、q RT-PCR、Western blot和转录组学等方法研究CLP-P1免疫刺激活性的分子机制,主要结果如下:1. C.lentillifera的营养成分分析本研究对海南省和山东省采集的C.lentillifera的营养成分进行了综合分析,并与先前报道不同产地的C.lentillifera和两种不同种类的海藻进行比较。发现海南省和山东省的C.lentillifera中的多糖含量高于E.cottonii和S.polycystum的含量。山东省的C.lentillifera必需氨基酸组成更符合FAO/WHO的理想模型,海南省和山东省的C.lentillifera中不饱和脂肪酸含量分别为44.35%和36.34%,其中PUFA含量高于Semporna、Sabah和S.polycystum。海南省的C.lentillifera中纤维含量高于山东省、Sempoma、Sabah和Petchburi。所有产地的C.lentillifera中灰分含量均低于S.polycystum和E.cottonii的灰分含量。2. CLP提取工艺优化在这项研究中,以CLP得率为指标,对超声处理时间、提取时间、提取温度以及液料比等提取工艺进行优化。对数据进行统计分析得到:超声处理时间为30 min,提取时间为9 h,提取温度为100°C,液料比为40:1为最佳提取工艺,CLP得率为3.215%,与模型的理论值误差为0.269%。3. CLP-P1分离纯化及结构解析采用阴离子层析柱和凝胶排阻层析柱分离出多糖组分CLP-P1和CLP-P2,测定CLP-P1分子量为1583.9 k Da;CLP-P1主要由Gal、Xyl和Man组成的均一杂多糖;通过甲基化和核磁共振分析CLP-P1的结果,发现CLP-P1可能是由β-D-Galp-（1→、→3）β-D（4SO4）-Galp-（1→、→4）β-D-Galp-（1→、→4）-β-D-Xylp-（1→基团组成的杂多糖,CLP-P1存在硫酸化基团,其修饰位点推测位于→3）β-D-Galp-(1→的C-4位,并且存在丙酮酸修饰基团;t-Man,t-Gal,3,4-Man（p）等基团含量低,没有明显的核磁信号。4. CLP-P1对巨噬细胞RAW264.7的免疫刺激活性采用体外细胞模型评价CLP-P1对巨噬细胞RAW264.7的免疫刺激活性,结果表明CLP-P1（6.25、12.5、25和50μg/m L）可显著提高巨噬细胞RAW 264.7的细胞增殖并且增强其吞噬作用,呈剂量性依赖。CLP-P1显著增强RAW264.7中ROS、NO/i NOS,IL-6、IL1β和TNF-α的分泌量和相关细胞因子基因表达。我们证明了CLP-P1可以通过促进细胞活性并增加NO/i NOS,IL-6、IL-1β和TNF-α的分泌和基因表达来改善RAW 264.7巨噬细胞的免疫功能。5. CLP-P1对巨噬细胞RAW267.7的TLR4受体的影响TLR4受体是调控巨噬细胞免疫刺激活性的关键受体,采用流式细胞仪测定不同浓度Try-CLP-P1-FITC与巨噬细胞RAW264.7结合率和Anti-TLR4的竞争作用。结果表明,随着Try-CLP-P1-FITC的浓度增大,与RAW264.7细胞结合率显著性增加（p<0.05）;Anti-TLR4组与Try-CLP-P1-FITC组对比,呈显著性降低。通过q RT-PCR和Western Blot测定TLR4的表达水平,TLR4的基因表达水平随着CLP-P1的浓度增大而显著增加,并呈剂量性依赖;TLR4的蛋白表达量与空白组对比,随着CLP-P1的浓度增大有轻微的递增,因此CLP-P1可激活RAW264.7巨噬细胞的TLR4信号通路。6. CLP-P1对巨噬细胞RAW264.7的免疫刺激活性机制的探讨通过火山图和聚类分析,发现CLP-P1（50μg/m L）组与空白组比较表达显著性上调了378个差异表达基因,显著性下调了592个差异表达基因,且有部分表达上调差异表达基因共同参与免疫调节。结合GO功能和KEGG富集通路,CLP-P1显著上调209条信号通路,显著下调220条信号通路,主要介导的免疫刺激活性的信号通路有Toll样受体信号通路、TNF信号通路、NOD样受体信号通路、自然杀伤细胞介导的细胞毒性、NF-κB信号通路、JAK-STAT信号通路和MAPK信号通路等以及上调了相关的基因表达。