论文部分内容阅读
第一部分4-苯基丁酸对糖皮质激素诱导的MIN6细胞内质网应激保护作用的研究【背景和目的】糖皮质激素(GC)可显著降低机体的葡萄糖耐量,其原因除了GC可显著增加胰岛素抵抗外,GC对胰岛功能的干扰也逐步受到关注。然而,GC诱导的β细胞功能损伤的复杂机制仍未完全阐明。内质网应激是胰岛β细胞损伤的重要机制之一。本研究旨在探讨GC对胰岛β细胞内质网应激的作用,并检测内质网应激的抑制物质——4-苯基丁酸(4-PBA)是否对GC诱导的胰岛β细胞的内质网应激有保护性抑制作用。【方法】胰岛β细胞细胞系MIN6细胞经不同浓度(0.1μmol/L和0.5μmol/L)地塞米松(DEX)干预不同时间(1小时,4小时,12小时和24小时)后,检测内质网相关基因如BIP,IRE1,ATF6,PERK和CHOP以及β细胞功能相关的基因GLUT2和PDX1表达水平。同时以4-苯基丁酸(4-PBA)联合DEX干预MIN6细胞,检测上述内质网相关基因以及β细胞功能相关的基因表达水平是否有差异。【结果】DEX干预MIN6细胞后未折叠蛋白反应相关基因BIP,IRE1,ATF6,PERK表达均升高,且呈现浓度和时间依懒性,相比于对照组,24小时0.5μmol/LDEX干预后BIP,IRE1,ATF6,PERK的m RNA表达分别增加5.72,6.27,5.40,4.43倍(P<0.001)。内质网应激介导的凋亡通路相关基因CHOP也呈时间依懒性升高,相比于对照组,0.5μmol/L地塞米松干预24小时后CHOP m RNA表达增加5.60倍(P<0.001)。加入4-PBA后,DEX诱导的内质网应激相关基因的表达明显降低(P<0.001),基本回到了对照组的水平。胰岛β细胞功能相关基因胰十二指肠同源异型盒基因(PDX1)和葡萄糖转运蛋白2(GLUT2),在高浓度0.5μmol/LDEX干预后降低,但4-PBA加入后对PDX1和Gl UT2的表达影响不大。【结论】糖皮质激素可直接诱导胰岛β细胞内质网应激和内质网应激介导的凋亡通路相关基因的高表达,而4-PBA能够显著缓解糖皮质激素的这一作用。糖皮质激素能降低胰岛β细胞功能相关基因表达,而4-PBA在此过程是否有确切的作用尚有待进一步研究。第二部分初发2型糖尿病胰岛素原与成纤维细胞生长因子21相关性初步研究【背景和目的】在2型糖尿病的发生和发展中,胰岛β细胞功能的丧失和β细胞数量的损失均伴随着ER应激,但目前没有简单有效的方法评估活体中特定细胞的内质网应激程度。成纤维细胞生长因子21(FGF 21)和胰岛素原(PI)水平被认为与内质网应激相关,因此我们初步比较初诊2型糖尿病和对照组外周血FGF 21、PI水平、胰岛素原比胰岛素比值(PI/I)及胰岛素原比C肽比值(PI/C)的差异,及其与糖尿病患病风险的相关性。【方法】我们分别收集初诊2型糖尿病患者37例和正常对照40例,收集病历资料并记录人体测量学指标,检测生化指标,空腹血浆葡萄糖,空腹胰岛素和C肽,以及血浆FGF-21和PI的浓度。【结果】与对照组相比,糖尿病受试者的空腹血浆FGF-21和PI浓度均显著增加(FGF21:36.02(33.70,38.40)VS.23.38(15.46,30.67),P<0.05;PI:116.28(65.50,263.16)VS.42.13(17.44,102.44),P<0.05)。将PI和FGF21按照三分位数分为三组,FGF21每增加一分位数发生糖尿病风险增加15.84倍;PI每增加一分位数发生糖尿病风险增加至2.87倍;PI/C每增加一分位数发生糖尿病风险增加1.91倍(P<0.05)。相关性分析显示,FGF21与P、PI/I及PI/C均有正相关。在多元线性回归分析中,血浆FGF-21和PI水平与空腹血糖呈正相关。增加纳入HOMA-IR和HOMA-β进多元回归分析后,FGF21、PI/I和PI/C均与HOMA-β有较强的负相关。【结论】初诊糖尿病患者FGF21和胰岛素原水平显著高于对照人群,提示在发生严重糖尿病前胰岛β细胞可能已经处于应激状态。FGF21和胰岛素原相关指标可能是评估胰岛β细胞功能的一种指标,联合FGF21和胰岛素原可能更好的预测糖尿病的发生。