miR-223在妊娠晚期高血压孕妇中的表达研究

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目的:子痫前期(Pre-eclampsia,PE)是一种与高血压、蛋白尿、血小板减少或肾功能不全相关的妊娠特异性综合征。全世界2%~5%的孕妇患有子痫前期,10%~15%的产妇死亡。子痫前期的发生、发展和诊断已成为当今临床研究中一个具有挑战性的问题。然而,目前的诊断仍然依赖于测量血压、血液测试和尿液分析(蛋白尿)的结果。因此,寻找早期诊断PE的特异性生物标志物已成为当前研究的热点。近年来,许多研究被设计用来识别可能的生物标志物,以便准确、及时地诊断PE。Micro RNAs(Mi RNAs)作为生物学过程中的关键介质,是一种小的、内源性的非编码RNA,与疾病的进展、细胞的增殖和发育密切相关。Mi RNA在PE中有不同的表达,可能对了解PE的病情及其发病机制有重要意义。以往的文献表明,血浆相关miR-223的异常表达与PE的发生发展有关。在本研究中,我们验证了miR-223在PE孕妇血浆中的表达水平,并与正常妊娠组进行了比较,利用生物信息学的方法对miR-223进行了靶基因的预测和分析,有助于我们进一步探讨miR-223对子痫前期的诊断价值,更好地理解PE的病理生理机制。方法:选择2020年6月-2021年6月来吉林大学第二医院产科住院的妊娠期孕妇和同期在本院体检的正常妊娠孕妇,所有孕妇都是单胎妊娠。分为以下六组:A1组:早期正常妊娠组,n=20;A2组:晚期正常妊娠组,n=20;B1组:早发性轻度子痫前期组,n=20;B2组:晚发型轻度子痫前期组,n=20;C1组:早发性重度子痫前期组,n=20;C2组:晚发型重度先兆子痫组,n=20。在无菌条件下空腹后收集血液标本,使用Trizol试剂从血清中提取RNA。分离RNA的260/280吸光度比为1.8~2.0,说明该RNA组分纯度高,可用于分析。根据miRBase数据库,用基因特异性引物从总RNA中合成了MIR-223和RNA U6特异性c DNA序列。逆转录(RT)反应,以SYBR Green为基础的实时荧光定量PCR法检测miR-223的实时PCR表达,U6作为对照,计算miRNAs的相对表达值。运用成熟的靶基因在线预测软件Target Scan7.2、miRDB和DIANA TOOLS三个靶基因数据库在线预测miRNA的靶基因,将三个预测软件预测得到的靶基因分别放到excel表中,然后对预测结果用在线软件venny2.1.0画出韦恩图,三个预测软件的结果取交集,将预测的交集靶基因通过DAVID数据库进行GO功能富集分析和KEGG富集分析。获得miR-223可能的靶基因。结果:与正常妊娠患者相比,PE患者血浆中miR-223的表达显著降低,提示血清miR-223是诊断PE的敏感和特异的生物标志物,miR-223可能为识别有发生PE风险的孕妇提供一种新的诊断方法。年龄、孕周、收缩压(SBP)、舒张压(DBP)、24小时尿蛋白等都是妊娠期高血压疾病的影响因素。miR-223可能通过调控NLRP3和FOXO1基因来参与子痫前期的发生过程。
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