【摘 要】
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泛素化对于细胞内环境的稳态维持至关重要。Ppa编码一种F-box蛋白,是SCF泛素化复合体的组分之一。据报道,Ppa参与调控了黑腹果蝇（Drosophila melanogaster）的体节形成和着丝粒定位,但是在脂代谢和精子发生上未见报道。本研究发现了Ppa能够促进脂肪的储存,并且在精子发生中起调控作用。研究结果如下:（1）PPA具有3个异构体,本研究通过PCR扩增得到Ppa的编码区序列,构建了
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泛素化对于细胞内环境的稳态维持至关重要。Ppa编码一种F-box蛋白,是SCF泛素化复合体的组分之一。据报道,Ppa参与调控了黑腹果蝇（Drosophila melanogaster）的体节形成和着丝粒定位,但是在脂代谢和精子发生上未见报道。本研究发现了Ppa能够促进脂肪的储存,并且在精子发生中起调控作用。研究结果如下:（1）PPA具有3个异构体,本研究通过PCR扩增得到Ppa的编码区序列,构建了目的基因表达载体和荧光融合蛋白表达载体,获得了转基因果蝇;利用da-Gal4驱动PPA-PA/PC-GFP的全身表达,发现PPA-PA/PC定位于3龄幼虫唾液腺和脂肪体中,以及雄性睾丸的储精囊和射精管中。（2）研究获得了表达两段sgRNA的转基因果蝇Ppa-sgRNA;将Ppa-sgRNA与表达Cas9蛋白的果蝇杂交,通过PCR鉴定,成功获得6株Ppa的缺失突变体Ppa1、Ppa2、Ppa3、Ppa4、Ppa5和Ppa6;经测序鉴定和序列比对,发现它们分别缺失了445bp、446bp、445bp、453bp、454bp和576bp。使用BODIPY 493/503和DAPI对3龄幼虫的脂滴进行染色标记,发现与对照组果蝇w1118相比,缺失突变体表现为脂滴变小;两个片段缺失等位基因的反式杂合突变体Ppa1/Ppa2也表现为脂滴减小。此外,Ppa1突变体表现为雄性睾丸的个体化过程缺陷和雄性不育。（3）在ppl>DGAT中敲低Ppa,发现Ppa能够增强唾液腺的异位脂肪累积表型;使用da-Gal4驱动Ppa超量表达导致脂滴的直径变大;在突变体中超量表达Ppa能够回复脂滴至正常状态。综上,本研究阐明了Ppa在果蝇中具有促进脂肪储存的功能,并且发现Ppa可能在雄性生殖上参与精子的个体化,为进一步揭示其分子机制打下基础。
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