羟基红花黄素A延缓IL-1β诱导软骨终板细胞退变的作用机制

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目的及意义椎间盘退变性疾病(如颈椎病)的病理是椎间盘退变。该类疾病患病率逐年上升,发病年龄日趋年轻,严重影响着患者生活质量,成为公认的难治性疾病。减少软骨终板损伤对防止椎间盘退变至关重要。保护软骨终细胞对预防和治疗椎间盘退变性疾病有重要意义。红花提取物为主的注射液对治疗骨性关节炎,滑膜炎及颈椎病等效果较好。羟基红花黄素A(Hydroxy safflower yellow A, HSYA)是中药红花的主要活性成分,具有广泛的药理作用。前期实验结果提示HSYA可能存在延缓椎间盘退变潜能。本实验在此基础上,进一步探讨HSYA对炎症诱导的椎间盘软骨终板细胞的保护机制,对新药开发,药物新适应症的扩展具有重要意义。方法以10ng/ml IL-1β诱导正常小鼠软骨终板细胞建立炎症退变细胞模型,并通过细胞化学染色,细胞免疫荧光,透射电镜观察、cck-8细胞增殖检测法、流式细胞仪分析、Real-time RT-PCR检测mRNA表达以及western blot检测蛋白表达等实验方法研究HSYA的具体作用机制。结果实验中发现10ng/ml IL-1β诱导软骨终板细胞炎症退变;不同浓度的HSYA均能拮抗IL-1β的抑制软骨细胞增殖作用,并能促进软骨终板细胞的增殖,HSYA10"5mol/L给药组作用最显著;HSYA可以拮抗诱导细胞上调Bax mRNA及蛋白表达,下调Bcl-2mRNA及蛋白表达的作用;HSYA能够维持IL-1β诱导软骨终板细胞正常形态、降低细胞肥大比例;HSYA能降低诱导细胞炎症因子IL-1β. TNF-α、IL-6、iNOs mRNA表达;HSYA可降低诱导软骨终板细胞、MMP-1胞质内表达,增加col Ⅱ、 aggrecan、TIMP-1胞质内表达;同时能降低诱导细胞colⅩ,MMP-1、MMP-13mRNA表达,增加col Ⅱ, aggrecan表达;对TIMP-1调节具有双向性,在退变早期降低诱导细胞TIMP-1mRNA表达,在后期则增加其表达。结论IL-1β可诱导原代小鼠椎间盘软骨终板细胞发生退变;HSYA能拮抗IL-1β抑制软骨细胞增殖,对软骨细胞增殖具有促进作用;HSYA具有拮抗IL-1β诱导小鼠椎间盘软骨终板细胞凋亡的作用;HSYA具有拮抗IL-1β诱导小鼠软骨终板细胞退变的作用。综上所述HSYA对IL-1β诱导的椎间盘软骨终板细胞具有保护作用。
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