选题依据:款冬花是菊科植物款冬Tussilago farfara L.的干燥花蕾,具有润肺、止咳、化痰的功效,临床上主要用于治疗咳嗽,也用于治疗气喘,急、慢性支气管炎等疾病。通过对市场流通的款冬花调研发现,款冬花主要为栽培品种,广泛分布在甘肃,河北、内蒙古等省。现行《中国药典》仅以款冬花的专属成分款冬酮的含量来评价药材质量可能存在一定片面性,且仅以“合格”、“不合格”来判定药材质量,无法从整体上反映药材质量,更没有优劣的等级划分。就目前市场销售与价格分析来看,款冬花在市场交易中尚未形成统一的质量优劣的划分标准,且市场中不同等级或价格款冬花区别主要在于花梗或根茎等掺杂非药用部位比例的不同,这就造成了市场中流通的款冬花药材质量存在不合格的问题。而在药材等级划分上,参照1984年由国家医药管理局和卫生部制订颁布的《76种药材商品规格标准》与现阶段《200种药材商品电子交易规格等级标准》中药材的等级划分,发现已经难以满足当今市场的需求。因此,当从市场调研的实际情况出发,拟建立款冬花药材活性成分的含量测定方法及限度;同时为全面有效的对款冬花的质量进行控制,建立款冬花药材的指纹图谱与特征图谱;对《中国药典》中检查项缺失的项目进行研究补充并进行合理规定;对款冬花药材进行初步的等级划分研究。建立全面的款冬花药材质量标准与等级划分情况,促进优质优价交易体系的形成,用以指导市场中款冬花药材流通。目的:1.在现行《中国药典》的标准上提升药材质量标准,为制订款冬花药材的行业标准奠定基础。2.分析市场现状为款冬花药材等级划分奠定基础。方法:1.以“敲入”的方法引入对款冬花有效部位的研究,通过对有效部位的“敲入”,以小鼠氨水止咳与酚红祛痰的模型辨识成分“敲入”后对药效的影响,进而证明其有效部位,并结合前期工作基础,发现其有效部位的代表成分。2.建立款冬花药材活性成分的含量测定方法,通过对大量样本的分析研究,制订合理的含量限度。3.利用HPLC-UV结合相似度评价、聚类分析及多元统计分析的方法建立款冬花药材指纹图谱。4.依据2015年版《中国药典》检查项下项目对市售款冬花各检查项进行测定,并通过大量样本的分析制订合理的限度。5.通过市场现状的分析对款冬花药材等级初步划分。结果:1.前期实验以“敲出”法发现正丁醇部位为止咳祛痰的活性部位,此次实验通过对有效部位的“敲入”,及其产生的药效学影响进一步佐证以正丁醇部位对于款冬花的止咳化痰作用至关重要,后经化学成分分析证明正丁醇部位中主要含有以绿原酸为代表的咖啡酰基奎尼酸类成分。2.款冬花中绿原酸、款冬酮的含量测定研究结果:通过对不同产区、不同储存时间的款冬花药材中绿原酸、款冬酮含量的比较分析可以得出以下规律:山西地区药材中款冬酮、绿原酸含量均高于其他地区,整体来看,河北地区药材质量同甘肃地区药材质量相差不大,款冬花各产区最新采收的药材中绿原酸与款冬酮平均含量均最高,而储存达四年的药材平均含量最低,同时在款冬酮的含量测定时发现,随储存时间的增长,含量呈明显下降趋势。因此,在制订绿原酸的含量限度时,依据《国家药品工作手册》含量限度的制订方法,综合储存1-3年的样本测定结果,暂定款冬花绿原酸的含量限度为0.800%。3.款冬花指纹图谱的研究结果:建立HPLC-UV的指纹图谱,样本分析时结合相似度分析、聚类分析与多元统计分析均得出不同产地款冬花药材化学成分具有较好的一致性,通过对款冬花不同部位的液相指纹图谱分析发现,导致这种一致性较高的原因在于款冬花的花梗、根、茎中化学成分种类与花蕾一致,仅在量上有一定差别。而聚类分析与多元统计分析发现储存时间对化学成分的影响大于产地间的差异带来的影响,有必要进一步分析研究。4.检查项下各项目研究结果:2015年版《中国药典》款冬花药材正文中未规定检查项目下水分、灰分项的含量限度。因此,依据水分测定结果,水分范围6.81~14.63%,剔除异常值后以最大值(11.94%)上浮10%设为水分的测定上限,暂定款冬花水分的限度为不得过13.0%;依据款冬花药材总灰分测定结果,总灰分范围7.0~9.9%,以最大值(9.9%)上浮10%设为总灰分的测定上限,暂定款冬花总灰分的限度为不得过11.0%。5.从商品药材的性状(外观完整性、表皮颜色、形状)、带1 cm以内花梗的花蕾(去除过长的花梗部分)占比、以及是否虫蛀、霉变、水分含量(干湿)等方面,制订款冬花药材的等级标准,将带1 cm以内花梗的花蕾占比在40%~70%间定为统货,将带1 cm以内花梗的花蕾占比大于70%的药材定为选货,且所有药材无虫蛀、霉变、潮湿的现象。结论:本研究通过对大量样本的分析研究,新增与药效相关的化学成分的含量测定,并制订含量限度;建立款冬花药材指纹图谱全面评价药材质量;补充《中国药典》检查项中未作规定项目的限度,建立款冬花药材质量标准与商品规格等级划分标准,用以指导市场中款冬花药材流通,促进优质优价交易体系的形成。