黄翅大白蚁肠道转录组比较分析及中肠木聚糖酶的纯化

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白蚁是生活在热带和亚热带地区的一种昆虫,属于昆虫纲等翅目。具有很强的纤维素降解能力,是自然界中最为典型的木质纤维素利用体系之一,在自然生态系统尤其是热带和亚热带地区生物质转化循环发挥重要的作用。在能源危机与环境污染日益严重的今天,白蚁及其共生系统对木质纤维素高效利用的机制,可为木质纤维素到生物乙醇的高效转化提供新的思路。对白蚁及其共生系统共同降解木质纤维素的机制基本有以下的共识:对于后肠中存在原生动物鞭毛虫的低等白蚁来说,低等白蚁与后肠中的原生动物形成的木质纤维素降解体系能够高效的对纤维素和半纤维素进行降解;后肠中不含有鞭毛虫的高等食木白蚁的后肠微生物也具有纤维素的降解潜力;高等白蚁中的培菌白蚁则可以依靠体外共生真菌对木质纤维素进行降解,其降解过程被普遍认为是:工蚁收集木质纤维素食物到蚁巢后,首先由年幼的白蚁将木质纤维素材料和共生真菌的孢子一起取食,食物和分生孢子经过肠道后,被排泄在菌圃上,完成共生真菌的“接种”形成新的菌圃。随着共生真菌的生长,其中的木质纤维素材料被真菌降解成为一些易降解的寡糖类物质,被其他工蚁取食。为了更具体的了解高等白蚁木质纤维素降解机制,本论文首先以高等培菌白蚁黄翅大白蚁Macrotermes bareyi为研究材料,对木聚糖酶活力分布最高的中肠部分的木聚糖酶进行纯化,通过多次纯化步骤得到了一个具有木聚糖酶活性的蛋白质Mbxyl(~17 kDa)并利用N-末端测序技术得到了 Mbxyl的N-末端序列,设计兼并引物尝试通过RACE的方法获得其全长cDNA序列,但未能得到。随后对M bareyi肠道不同部位的转录组进行分别高通量测序,对肠道不同部位进行比较转录组学的分析,并着重对转录组数据中的木质纤维素降解相关基因进行比较分析。在转录组数据中共发现有136个糖苷水解酶基因,分属于29个家族,其中一些糖苷水解酶基因在白蚁肠道各部分中有明显的表达差异,可能在肠道中起到了不同的作用。在转录组数据中未能找到木聚糖酶(GHF10和GHF11),也未能找到有关Mbxyl的相关信息。由于缺少高等白蚁的基因组信息,转录组测序所得数据库中的木质纤维素降解相关基因并未能全部分析,对所得数据还需更深的研究。总而言之,本论文以黄翅大白蚁为研究材料,对肠道中的木聚糖酶进行分离纯化,但由于未能得到该酶的全长cDNA,所以对其来源不能确定,同时分析了肠道不同部分转录组中有关木质纤维素降解基因的差异情况。本研究为高等培菌白蚁的研究提供了丰富的肠道转录组数据,丰富了对高等白蚁体内木质纤维素降解机制的认识。
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