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目的:人内源性逆转录病毒(Human Endogenous Retroviruses,HERVs)广泛存在于人类基因组序列中,占人基因组序列的8%-12%。HERV-W家族是HERVs家族中的一员,分类上属于Class Ⅰ,与γ逆转录病毒具有相似元件。据报道,HERV-W的包膜蛋白(env)与许多精神神经疾病密切相关,这些疾病存在自身免疫现象。并且HERV-W env被发现可引发免疫反应,但HERV-W env引起的免疫反应是否具有HLA-A*0201限制性,尚未见报道。本文的目的在于研究HERV-W env的HLA-A*0201限制性CTL抗原表位的免疫潜能,为HERV-W env多肽疫苗研究提供实验基础,并且为神经精神类疾病的治疗研究提供一个新的思路。方法:(1)HLA-A*0201限制性抗原表位的预测与合成:利用SYFEPEITHI和BIMAS两个抗原表位多肽预测软件,对HERV-W env表面的抗原表位进行预测;(2)HLA-A*0201血样本的筛选:用PCR的方法对血液样本进行筛选,获得HLA-A*0201阳性血液标本,并从中分离出PBMC(人外周血单核细胞)备用;.(3)多肽对T淋巴细胞的增殖作用检测:用多肽负载HLA-A*0201阳性的PBMC,用CCK的方法连续8天检测外周血单个核细胞(Peripheral blood mononuclear cells,PBMC)细胞的增殖情况;(4)多肽刺激的T淋巴细胞分泌干扰素γ(IFN-γ)的能力检测:用ELISA和ELISPOT两种方法,分别检测了多肽刺激后的T细胞培养基上清中的IFN-γ和多肽刺激后的T细胞分泌的IFN-γ量;(5)多肽刺激CTL对靶细胞的杀伤作用检测:靶细胞为瞬时转染pCMV或pCMV-env的U251和A172细胞系,效应细胞为分别用合成的5条多肽及阴性对照多肽刺激后的T淋巴细胞。利用流式细胞术检测靶细胞的凋亡,乳酸脱氢酶(LDH)法检测靶细胞的死亡率。结果:(1)通过预测软件SYFEPEITHI和BIMAS,筛选出同时满足SYFEPEITHI得分大于20,BIMAS得分大于10的多肽,从中选择了 SYFEPEITHI得分相对高的5条多肽送到公司合成:TLQDQLNSL(简称多肽T)、WILPFLGPL(简称多肽W)、CLPSGIFFV(简称多肽C)、RVADSLVTL(简称多肽R)以及QLNSLAAVV(简称多肽Q),同时合成的乙肝核心抗原(HBc117e125 EYLVSFGVW,命名为多肽E)作为阴性对照多肽。(2)经多肽W、Q、T、C负载的PBMC出现增殖,在第8天,PBMC的增殖量达到最高,其中多肽W负载的PBMC增殖至将近2.2倍,而多肽Q、T、C负载的PBMC增殖至大约1.8,1.4,1.6倍,均具有极其显著性差异,而多肽R负载的PBMC增殖量与阴性对照多肽E相比没有明显差异。以上表明,多肽W、Q、T、C具有刺激PBMC细胞增殖的作用。(3)ELISPOT结果显示,经多肽W、Q、T刺激的T淋巴细胞,产生的IFN-y的量与阴性多肽对照组相比分别增加了 4、3、3.7倍(P<0.0001),具有显著的统计学差异,多肽C刺激的T淋巴细胞产生的IFN-y的量也增加了 0.8倍(P<0.05),具有显著性差异,而多肽R刺激的T淋巴细胞产生的IFN-γ的量,与阴性对照多肽E相比没有明显差异;ELISA结果也获得进一步的证实,经多肽W、Q、T、R刺激的T淋巴细胞,上清中IFN-γ分泌的量与阴性多肽对照组相比分别增加了0.6、0.7、0.8、0.7倍(P<0.05),结果具有统计学意义。由此可见,多肽W、Q、T具有刺激T淋巴细胞分泌IFN-y的能力。(4)经多肽W、Q、T刺激的T淋巴细胞,能够特异性杀伤HLA-A*0201阳性且表达HERV-W env的U251靶细胞,与阴性多肽对照组相比,死亡率分别增加了 1、0.75、0.74倍(P<0.0001),结果具有显著性差异;凋亡率分别增加了1.6、1.43、1.52倍,其中经多肽R刺激的T淋巴细胞,导致靶细胞的凋亡增加了 0.9倍。所有候选多肽对于HLA-A*0201阴性表达HERV-W env的A172靶细胞,则没有杀伤作用;而对于HLA-A*0201阳性但不表达HERV-Wenv的U251靶细胞,也没有明显的杀伤作用。综上所述,多肽W、Q、T刺激的T淋巴细胞能够特异性杀伤HLA-A*0201阳性且表达HERV-Wenv的U251靶细胞。结论:(1)多肽W、Q、T具有免疫原性;(2)多肽W、Q、T刺激的T细胞杀伤靶细胞必须同时具备两个条件:HLA-A*0201限制性以及HERV-Wenv阳性表达;(3)多肽W、Q、T是HERV-Wenv的HLA-A*0201限制性CTL抗原表位。