拟南芥谷氨酸脱羧酶纯合突变体的鉴定和表型观察

来源 :中南民族大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:leec208
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植物的开花受控于多种因素的影响。在长日照条件下,外源性γ-氨基丁酸(GABA)喷施能够促进野生型拟南芥植物开花提前4-6天。为探讨植物开花和内源性GABA的关系,本论文研究了GABA合成的关键酶谷氨酸脱羧酶(GAD)的各种突变植株对开花时间的影响,并进行了各种突变体的根长和根尖形态的观察。取得的主要结果如下:  1.从拟南芥信息资源中心(The Arabidopsis Information Resource,TAIR)购买4种GAD突变体(gad1,gad2,gad3和gad4)首先通过PCR的方法,筛选到这些基因的纯合突变体,然后通过杂交的方法获得纯合的双突变体(gad12a,gad12b)用于后续的研究;  2.通过对gad1,gad2,gad3,gad4纯合单突变体开花时间的观察,各单突变体均表现为延迟开花,其中gad2b的延迟作用最为明显;  3.gad2a,gad2b,gad4,gad12b的根长度(7d)均比野生型的短,其中gad12b的根长度最短;  4.根的碘化丙碇(PI,1μg/ml)整体染色显示,gad1,gad2b,gad3,gad4根冠层数目明显少于对照,而静止中心细胞的数目无明显区别,但体积都小于野生型的静止中心细胞;双突变体gad12b根冠层数目的也比野生型少,其中20%的根尖呈现膨大状态,且静止中心细胞体积较大;  5.成功构建35S-gad2-GFP(p167)质粒表达载体,用浸花法通过农杆菌介导感染拟南芥花序的方法,成功构建gad2回复突变拟南芥植株,并获得T2代种子;6.Diurnal是一个基于网络的在线分析工具,我们分析了3个生物钟核心节律基因(TOC1,CCA1和LHY)的表达模式的变化。我们的实验表明,γ-氨基丁酸(GABA在1.0 mmol/L)对这些基因表达模式的改变主要是增加了这些基因表达的幅度。这表明 GABA对拟南芥的提早开花的促进作用有可能是通过调节生物钟核心基因的周期性表达的强度有关。
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