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黄曲霉毒素(Aflatoxin, AFT)是目前已知的两百多种真菌毒素中毒性最强、污染频率最高,寄生曲霉真菌(A.parasiticus)和黄曲霉(Aspergillus flavus)等产生的一组化学结构类似的二级次生产物,通过饲料或食品严重危害动物和人类的生命安全。在天然污染的食品当中,黄曲霉毒素B1(AFB1)最常见,其毒性、致癌、致畸性也最强。随着生活水平的提高,食品安全已引起各国政府的特别关注。欧盟在2000年就提出了世界上最严格的安全标准和检验标准,其中AFB1为2μg/kg,总AFT4μg/kg。由于AFB1污染十分严重,为避免此状况的发生,人们迫切需要研究出一种高效经济、快速、容易操作、精确且高普及性的AFB1检测方法,对农副作物及产品的运输、储存、生产和销售的各个渠道都能有效地监查控制,使广大消费者最基本的健康问题得到保障。AFB1检测试剂盒具有快速、简便、经济等优点备受青睐,但对于这种试剂盒的市场化开发需要AFB1和AFB1抗体做原料。本实验把提取、分离纯化AFB1, AFB1的高利用率以及制备高效价、高特异性的抗体等因素综合研究,为开发AFB1检测试剂盒提供了重要的材料来源。本研究主要内容包括:黄曲霉菌的培养及AFB1的提取纯化;AFB1人工抗原的高效合成研究;以及AFB1抗血清的制备与研究。在黄曲霉菌培养及AFB1的提取纯化中:经过真菌培养:毒素提取;氧化铝柱层析、硅胶柱层析分离纯化;TLC、HPLC检测;等步骤获得AFB1精制品,纯度达到95%以上。在AFB1人工抗原的制备研究过程中:首先经过肟化反应制备AFB1肟(AFB1-O),AFB1的利用率高达94.2%;然后用碳二亚胺法制备AFB1人工抗原;最后根据AFB1与修饰过的牛血清蛋白(C-BSA)的不同起始摩尔比反应得到不同摩尔比的偶联产物。在AFB1抗血清的制备与研究过程中:将不同反应摩尔比所得人工抗原(AFB1-BSA)刺激Balb/C小鼠产生高特异性抗体;酶联免疫实验(ELISA)测定产生的抗血清效价;抗体灵敏度和特异性检测;交叉反应结果表明抗体具有特异性。同时将效价高、特异性好的抗体和和AFB1高利用率结合起来研究,确立了适宜的免疫途径。即AFB1与BSA起始反应摩尔比为40:1,偶联物AFB1与BSA摩尔比为4.94:1,每次免疫剂量为100μ/mL,经过四次免疫得到血清效价高达1056000。