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目的:探讨CaN/NFAT3信号通路是否介导线粒体乙醛脱氢酶2对糖尿病大鼠心肌损伤保护作用及可能分子机制方法:无菌条件下取出生3天内SD大鼠乳鼠心脏,心尖部剪碎并用胰蛋白酶和胶原酶Ⅱ混合酶消化成单个细胞,经差速贴壁后并在培养液中加入5-Brdu进行原代培养,当其生长呈融合状态时对心室肌细胞进行处理。应用免疫荧光检测培养的乳鼠心肌细胞内α-SA蛋白以此鉴定原代培养心室肌细胞纯度;实验涉及如下分组:5.5mmol/L糖对照组（M）、30mmol/L高糖组（MH）、30mmol/L高糖加乙醛脱氢酶2激动剂（Alda-1）组（MHA）、30mmol/L高糖加乙醛脱氢酶2抑制剂（Daidzin）组（MHD）、30mmol/L高糖加乙醛脱氢酶2激动剂（Alda-1）和抑制剂（Daidzin）组（MHAD）、30mmol/L高糖加乙醛脱氢酶2激动剂（Alda-1）和NFAT3抑制剂（11R-VIVIT）组（MHAV）;CCK8试剂盒测量NFAT3抑制剂最佳使用浓度;荧光探针检测细胞内钙离子浓度;ELISA测定细胞内CaN含量;免疫荧光检测细胞内CaNAβ含量;Western blot检测ALDH2、CaN、NFAT3蛋白表达;CCK8检测各组细胞活性;羟脯胺酸试剂盒检测细胞培养上清液羟脯胺酸含量;DHE探针检测各组细胞内氧化应激水平。结果:1.心肌细胞鉴定结果:通过差速贴壁结合5-Brdu得到纯度较高的心肌细胞,并且通过对特异性表达于心肌细胞和骨骼肌细胞中α-横纹肌肌动蛋白进行免疫荧光染色后,心肌α-SA抗原免疫荧光呈阳性反应,为绿色,位于细胞浆内,DAPI细胞核染色为蓝色。2.NFAT3抑制剂最佳使用浓度:根据实验结果显示出随着NFAT3抑制剂11R-VIVIT浓度增加,细胞活性也随之增加,当药物浓度达到2uM时,细胞活性达到最高（P<0.01）,且再增加药物使用浓度,细胞活性反而降低。3.心肌细胞内钙离子浓度:与M组相比,MH组Ca2+浓度均增高（P<0.01）;与MH组相比,MHA组Ca2+浓度降低（P<0.05）,MHD组Ca2+浓度升高（P<0.01）,而MHAD组Ca2+浓度相对于MHD组有所降低。4.心肌细胞内CaN含量:与M组相比,MH组细胞内CaN含量显著升高（P<0.01）;与MH组相比,MHA组细胞内CaN含量降低（P<0.01）,MHD组细胞内CaN含量升高（P<0.05）;与MHD组相比,MHAD组细胞内CaN明显降低（P<0.01）;5.心肌细胞内CaNAβ含量:心肌细胞内CaNAβ含量在正常组M组中最低;与M组相比,心肌细胞内CaNAβ含量在MH组、MHD组、MHAD组显著升高（P<0.01）;与MH组相比,心肌细胞内CaNAβ含量在MHA组显著减低（P<0.01）;相比于MHA组,心肌细胞内CaNAβ含量在MHAD组再次升高（P<0.01）;而相比于MH组,心肌细胞内CaNAβ含量在MHD组显著升高。6.心肌细胞内ALDH2、CaN、NFAT3蛋白表达:与M组相比,MH组ALDH2蛋白表达降低（P<0.05）,CaN蛋白表达增高（P<0.05）、NFAT3蛋白表达增高（P<0.01）;与MH组相比,MHA组CaN蛋白和NFAT3蛋白表达降低（P<0.05）、ALDH2蛋白表达增加（P<0.05）;与MHA组相比,MHAV组的ALDH2蛋白表达量无明显变化（P>0.05）,NFAT3蛋白表达量降低（P<0.05）。7.心肌细胞活性:心肌细胞活性在MH、MHAD、MHD组较M组活性明显降低（P<0.01）;与MH组相比,MHA组细胞活性升高（P<0.05）,MHV组中心肌细胞活性也明显增高（P<0.05）;与MHAD组相比,MHD组心肌细胞活性显著降低（P<0.05）。8.心肌细胞培养上清液羟脯胺酸含量:与M组相比,MH组心肌细胞培养上清液中羟脯胺酸含量明显增高;与MH组相比,MHA和MHA组中心肌细胞培养上清液中羟脯胺酸含量显著减少,而在MHD组中羟脯胺酸含量则明显增加;与MHA组相比,MHAD在中羟脯胺酸含量明显增高（P<0.01）。9.心肌细胞内氧化应激水平:与正常组相比,MH组中DHE荧光密度显著增加;与MH组相比,荧光密度在MHA和MHV组则明显减小,而在MHD组则进一步增大;与MHD组比较,MHAD组荧光密度则显著减少（P<0.01）。结论:1.激动线粒体ALDH2可提高心肌细胞活力、减弱心肌细胞内氧化应激及羟脯胺酸水平;2.抑制CaN/NFAT3信号通路后,线粒体ALDH2的表达无明显影响,心肌细胞活力增加,心肌细胞内氧化应激及羟脯胺酸水平减弱;3.线粒体ALDH2对高糖诱导的乳鼠心肌细胞起保护作用,其机制可能与ALDH2对Ca2+-CaN-NFAT3信号通路的负调节作用有关。