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三棱是一种草本植物的干燥块茎,属于黑三棱科(Sparganiaceae Hanin),具有破血行气,消积止痛等功效。本文以三棱为原料,依次采用热水、螯合剂、1.0 mol/L Na OH与4.0 mol/L Na OH四种不同溶剂从三棱中依次提取出4个粗多糖组分RSB、RSC、RSDA和RSCA,并进一步通过DEAE-Cellulose离子交换色谱柱分离纯化获得7个分级组分RSB-1、RSB-2、RSB-3、RSB-4、RSDA-1、RSDA-2与RSDA-3。采用GC、GC-MS、NMR以及部分酸水解等一系列化学和仪器分析法对三棱多糖组分进行结构表征,利用药理学实验研究了三棱多糖的生物活性,并对多糖抗炎活性作用机制进行了探讨。论文研究结果为三棱及其多糖的深入研究开发提供了科学理论依据。论文的主要研究结果如下:(1)理化性质结果表明,粗多糖RSB、RSC、RSDA和RSCA的总糖含量分别为54.51%、70.01%、85.36%和88.34%,糖醛酸含量分别为5.43%、3.16%、0.59%和0.38%,蛋白质含量分别为24.00%、19.92%和0.95%,其中RSCA中未检测到蛋白质。微观和热稳定性分析表明RSB、RSC、RSDA和RSCA的微观结构差异显著,且RSDA与RSCA表现出更佳的热稳定性。体外抗氧化及细胞免疫调节活性检测结果表明,RSB与RSDA具有相对较好的生物活性。(2)化学成分分析结果显示分级组分RSB-1、RSB-2、RSB-3、RSB-4、RSDA-1、RSDA-2与RSDA-3的成分组成差异显著。其中,RSB-4、RSDA-2与RSDA-3经HPGPC鉴定为均一组分,平均分子量依次为9.32×10~5、8.23×10~5和8.18×10~5Da。单糖组成分析结果显示,RSDA-2主要由葡萄糖、阿拉伯糖、木糖以及半乳糖组成,相应的摩尔比率为1.00:5.83:9.01:1.37;RSDA-3主要由阿拉伯糖和木糖组成,相应的摩尔比率为1.00:1.50;RSB-4是葡聚糖。(3)结构分析结果表明,多糖RSB-4的主链可能是由(1→3)-α-D-Glcp组成,其中在(1→3)-α-D-Glcp的O-6位连有支链T-β-D-Glcp和(1→6)-α-D-Glcp;RSDA-2的主链可能是由(1→2)-β-D-Xylp、(1→3)-β-D-Xylp和(1→3)-α-D-Arap组成,其中在O-4位连有支链,支链由T-α-L-Xylf、T-β-D-Glcp、T-α-D-Galp、(1→4)-β-L-Arap和(1→4)-β-D-Xylp组成;RSDA-3的主链可能是由(1→2)-β-D-Xylp、(1→3)-β-D-Xylp和(1→3)-α-D-Arap组成,其中在O-4位连有支链,支链由T-α-L-Xylf、和(1→4)-β-D-Xylp组成。(4)抗炎活性检测结果表明三棱多糖RSB-4、RSDA-2与RSDA-3能有效促进巨噬细胞的增殖,增殖指数最高依次达到1.46、1.49与1.45。RSB-4、RSDA-2与RSDA-3均对LPS诱导的NO的产生具有一定的拟制作用,当剂量浓度均为20μg/m L时,最高抑制率依次为23.74%、25.89%和22.21%。支链的缺失对三棱多糖RSB-4、RSDA-2与RSDA-3的活性均产生不同程度的影响。(5)通过RT-PCR与Western-Blot实验对多糖RSDA-2的抗炎活性作用机制进行探讨。RT-PCR结果表明RSDA-2能显著抑制炎症因子i NOS、IL-1β和TNF-αm RNA表达,从而减缓和预防炎症反应的进行。Western Blot实验结果表明,RSDA-2能够通过抑制LPS诱导的IκB、p65的磷酸化,抑制巨噬细胞NF-κB通路的活化,从而抑制炎性介质的表达与分泌,发挥抗炎作用。