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目的:阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease,AD）是一种与衰老相关的神经退行性疾病,是老年痴呆中最为常见的一种类型。组蛋白乙酰化修饰在AD的发生、发展中起着重要作用。组蛋白去乙酰化酶（Histone deacetylases,HDACs）可通过影响组蛋白乙酰化修饰调控AD相关基因转录,已成为AD防治的分子靶标。在HDACs的众多亚型中,HDAC2/3与AD关系最为密切,敲除HDAC2或抑制HDAC3可明显改善AD认知功能障碍。γ-氨基丁酸（γ-aminobutyric acid,GABA）是一种广泛分布于中枢神经系统的抑制性神经递质,同时还是一种具有多种生物学作用的食品功能因子。有证据表明,AD脑内GABA含量降低。课题组前期研究发现,GABA是一种HDAC抑制剂。上述提示AD脑内HDACs的改变可能与GABA含量的异常降低有关,但GABA如何调控HDACs的表达尚不清楚。生物信息学预测发现,miR-34a可调控HDAC2/3表达。白血病相关研究发现,CCAAT增强子结合蛋白α（CCAAT/enhancer binding proteinα,CEBPα）可通过启动子激活机制上调miR-34a表达。有证据显示,磷酸肌酸（creatine phosphate,CP）可通过CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白（CCAAT/enhancer binding protein homologous protein,CHOP）调控CEBPα的表达。CP是一种高能磷酸化合物,是细胞内能量传递系统的重要组成部分。GABA也与脑内能量代谢相关,提示GABA可能通过CP-CEBPα-miR-34a抑制HDAC2/3表达,但有待证实。炎症反应是AD发生发展的重要环节。AD脑内的慢性炎性反应可能是由不断聚积的Aβ激活小胶质细胞和星形胶质细胞释放大量白细胞介素-1β（interleukin-1beta,IL-1β）、IL-6、肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factorα,TNFα）等细胞炎性因子而引起的。有文献报道,GABA能够抑制胶质细胞炎性因子IL-1β、IL-6及TNFα表达,调节炎症反应。另有文献报道IL-1β、IL-6和TNFα表达受HDACs调控。GABA能否通过抑制HDACs下调炎性因子表达尚未见报道。本研究探讨了HDAC2/3在GABA拮抗Aβ诱导的U251细胞炎性因子表达升高中的作用及GABA抑制HDAC2/3表达的作用机制,研究结果究为进一步阐释AD发病机制、探索AD有效防治提供了新线索。方法:1 HDAC2/3在GABA拮抗Aβ诱导的U251细胞炎性因子表达升高中的作用研究。1.1体外培养星形胶质细胞（U251）系,以GABA（终浓度为0～1280 n M）处理U251细胞,培养24 h,采用MTS方法检测各组细胞活力。1.2以20 n M GABA预处理U251细胞,培养3 h后,以10μM Aβ处理细胞,培养24 h,采用q RT-PCR、Western Blotting方法检测细胞IL-1β、IL-6和TNFα、HDAC2/3 m RNA及其蛋白表达。1.3以si RNA分别沉默U251细胞HDAC2、HDAC3,培养24 h,采用q RT-PCR、Western Blotting方法检测细胞IL-1β、IL-6和TNFαm RNA及其蛋白表达。2 GABA通过CP-CEBPα-miR-34a抑制HDAC2/3表达的研究。2.1以20 n M GABA预处理U251细胞,培养3h后,以10μM Aβ处理细胞,培养24 h,采用q RT-PCR方法检测细胞miR-34a表达,q RT-PCR、Western Blotting方法检测细胞CEBPαm RNA及其蛋白表达,ELISA方法检测细胞CP水平。2.2以miR-34a模拟物、抑制剂分别处理U251细胞,培养24 h,采用q RT-PCR、Western Blotting方法检测细胞HDAC2/3 m RNA及蛋白表达。2.3以si RNA沉默U251细胞CEBPα,培养24h,采用q RT-PCR方法检测细胞miR-34a表达。2.4以CP（终浓度为0～40 m M）处理U251细胞,培养24 h,采用MTS方法检测各组细胞活力。2.5以5 m M CP处理U251细胞,培养24 h,采用q RT-PCR、Western Blotting方法检测细胞CEBPαm RNA及蛋白表达。结果:1 HDAC2/3介导GABA拮抗Aβ诱导的U251细胞炎性因子表达升高。1.1随着GABA（5～80 n M）浓度的增加,细胞活力逐渐升高;GABA浓度在5 n M、20 n M时对细胞活力无明显影响（P>0.05）;GABA浓度在80 n M时,细胞活力达到最大且明显高于对照组（P<0.01）;GABA浓度增加到320n M、1280 n M时,细胞活力逐渐恢复至对照组水平,其中320 n M GABA处理的细胞活力仍明显高于对照组（P<0.05）;1280 n M GABA处理的细胞活力与对照组相比,未见统计学差异（P>0.05）。1.2 GABA拮抗Aβ诱导的U251细胞IL-1β、IL-6、TNFα、HDAC2/3表达升高（P<0.01或P<0.05）。1.3沉默HDAC2或HDAC3的U251细胞炎性因子表达降低（P<0.01）。2 GABA通过CPCEBPα-miR-34a抑制HDAC2/3表达。2.1 GABA拮抗Aβ诱导的U251细胞miR-34a、CEBPα表达及CP水平降低（P<0.05或P<0.01）。2.2 Mi R-34a下调U251细胞HDAC2/3表达（P<0.05或P<0.01）。2.3沉默CEBPα的U251细胞的miR-34a表达降低（P<0.01）。2.4 CP浓度在2.5 m M时,细胞活力呈上升趋势,但与对照组相比,无统计学差异;随着CP浓度（5～40 m M）的增加,细胞活力呈下降趋势;CP浓度在20、40 m M时,细胞活力较对照组显著降低,差异具有统计学意义（P<0.05或P<0.01）。2.5 5 m M CP处理的U251细胞CEBPα表达升高（P<0.01）。结论:HDAC2/3介导GABA拮抗Aβ诱导的U251细胞IL-1β、IL-6和TNFα表达的升高。GABA可通过CP-CEBPα-miR-34a抑制HDAC2/3的表达。