羊乳营养均衡,富含乳脂和不饱和脂肪酸。这些营养成分在医疗保健方面具有显著疗效,其含量很大程度上取决于动物的日粮结构等外部条件。然而,我国山羊饲养规模与管理方式均处于较低水平,已成为限制提高山羊生产性能及乳品质的主要瓶颈。近年来,利用分子生物学手段提高羊乳中有益脂肪酸的含量成为现代山羊育种的重要途径,但目前对羊乳中脂肪酸代谢的调控机理尚未明确。c AMP应答元件结合蛋白(CREB)是一类重要的核蛋白,可通过自身磷酸化和去磷酸化,激活调控脂代谢相关靶基因的转录活性,从而调控哺乳动物组织及器官内脂代谢相关过程。目前,该基因在反刍动物的乳脂代谢中鲜有研究。本研究通过克隆奶山羊乳腺组织中CREB基因的CDS区,构建靶向该基因的腺病毒过表达载体和靶向干扰该基因的si RNA,并检测乳脂代谢相关基因表达水平、细胞内总甘油三脂含量、不饱和脂肪酸含量及去饱和指数,为进一步揭示该基因在山羊乳腺上皮细胞乳脂代谢中的功能,提高山羊乳品质奠定理论基础。主要研究结果如下:1、首次从山羊乳腺组织中克隆到全长为984 bp的CREB基因CDS区(Gen Bank登录号:MK158073.1),与牛、人和鼠的序列相似度分别为98%、95%和95%,氨基酸序列相似性均在95%以上。且C端b ZIP区域高度保守。2、采用RT-q PCR方法,检测CREB基因在山羊乳腺组织不同泌乳时期表达水平结果表明:该基因在泌乳盛期乳腺组织中的表达量显著高于干奶期(P<0.05)。3、构建CREB基因腺病毒过表达载体,并将其感染奶山羊乳腺上皮细胞。结果表明:与对照组相比,过表达CREB显著上调细胞中脂代谢相关基因SREBF1、FASN、ACACA、LPL、FABP3、ACOX1、CPT1B、ATGL和DGAT1基因的m RNA水平(P<0.05),并显著上调细胞内Total C16:1和cis-9 C18:1含量及去饱和指数(P<0.05),细胞内TAG含量显著增加(P<0.05)。4、设计合成靶向CREB基因的si RNA序列,并将其转染至奶山羊乳腺上皮细胞。结果表明:与对照组结果相比,干扰CREB基因显著降低FASN、ACACA、SCD1、LPL、FABP3、CPT1B、DGAT1和GPAM基因的表达量(P<0.05)。同时,干扰CREB基因显著下调了细胞内TAG含量(P<0.05),而对Total C16:1和cis-9 C18:1含量及去饱和指数没有显著影响。综上所述,本研究成功克隆到奶山羊CREB基因的CDS区。在奶山羊乳腺上皮细胞中,CREB基因能够促进脂代谢相关基因的转录水平,影响细胞内MUFA含量及TAG含量,本研究为该基因的在乳脂代谢中的功能研究奠定了理论基础。