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目的建立转染人突变CD59(hmCD59)-pALTER-MAX重组质粒的CHO细胞模型；利用ANTI-FLAG M2亲和层析的方法提取纯化hmCD59重组蛋白；以纯化的hmCD59重组蛋白免疫Balb／c小鼠，制备抗hmCD59的多克隆及单克隆抗体；为最终设计出以抗hmCD59单克隆抗体为基础的诊断与治疗措施打下坚实的理论基础，为糖尿病血管并发症的研究提供新的思路与手段。方法将含有hmCD59全长序列的重组pALTER-MAX质粒，运用脂质体介导法，与pcDNA3质粒共转染中国仓鼠卵巢细胞(CHO细胞)，以新霉素类似物G418筛选出抗性克隆；采用免疫荧光技术筛选转染细胞阳性克隆；不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测转染CHO细胞hmCD59的表达情况；表达产物经ANTI-FLAG M2 affinity gel亲和层析纯化，以SDS-PAGE、免疫印迹法(Western blot)和酶联免疫吸附实验(ELISA)对纯化产物进行鉴定；将纯化的hmCD59重组蛋白免疫Balb／c小鼠，分别制备抗hmCD59的多克隆及单克隆抗体，ELISA法检测抗体效价及免疫学活性。结果免疫荧光与SDS-PAGE检测证实建立了表达hmCD59的CHO转染细胞模型；经ANTI-FLAG M2 affinity gel亲和层析获得电泳纯的hmCD59，蛋白浓度为0.6mg／ml，Western blot与ELISA检测结果显示纯化hmCD59与抗hmCD59抗体特异结合；纯化hmCD59免疫Balb／c小鼠获得的抗血清间接ELISA效价为1∶100；通过淋巴细胞杂交瘤技术获得1株分泌特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株，其培养上清效价为1∶16。结论成功构建了转染hmCD59-pALTER-MAX重组质粒的CHO细胞模型；重组hmCD59在CHO细胞表面稳定表达；亲和层析法可以获得电泳纯并具有免疫学活性的hmCD59蛋白；进而免疫Balb／c小鼠获得了抗hmCD59的多克隆及单克隆抗体，为抗hmCD59抗体的功能研究及临床应用奠定了基础。