目的抗菌肽merecidin作用于肺腺癌A549细胞后,通过检测细胞自噬相关蛋白表达差异以及观察merecidin对细胞亚结构的影响来探究merecidin诱导A549细胞自噬,并探讨详细的作用机制。方法1.利用CCK-8法检测0-16μmol·L-1merecidin对肺腺癌A549细胞增殖的抑制作用,测定其IC50值;2.质谱检测抗菌肽9μmol·L-1merecidin处理肺腺癌A549细胞后蛋白质差异表达水平,并筛选出表达变化明显的自噬相关蛋白,富集调控自噬信号通路;3.透射电子显微镜检测0、9μmol·L-1merecidin对A549细胞,KO-MAPK1（敲除）,NC-KO-MAPK1（敲除空载组）,OE-MAPK1（过表达）及NC-OE-MAPK1（过表达空载组）细胞超微结构的影响;4.MDC染色检测0、9μmol·L-1 merecidin对A549细胞,KO-MAPK1,NC-KO-MAPK1,OE-MAPK1及NC-OE-MAPK1细胞系的影响;5.AO染色检测0、9μmol·L-1 merecidin对A549细胞,KO-MAPK1,NC-KO-MAPK1,OE-MAPK1及NC-OE-MAPK1细胞系的影响;6.CYTO-ID实验检测0、9μmol·L-1 merecidin对A549细胞,KO-MAPK1,NC-KO-MAPK1,OE-MAPK1及NC-OE-MAPK1细胞系的影响;7.Western blot实验检测0、9、18μmol·L-1 merecidin对A549细胞组、OE-MAPK1、KO-MAPK1组细胞ATG5、ATG7、ATG13、ULK1、LC3、MAPK1、P62、β-tublin蛋白表达的影响。结果1.抗菌肽merecidin抑制A549细胞增殖,24h半数抑制浓度IC50为9.05μmol·L-12.蛋白组学分析:merecidin作用于A549细胞后,质谱肽段检测,Maxquant数据库检索分析整理结果显示表达上调的蛋白有:ATG2B,ULK1,RAB7A,ATG13,ATG9A等;表达下调的蛋白有:MAPK1,EIF4B,EGFR,TSC2,PAK4等;参与的主要的细胞信号通路有:PI3K-Akt,mTOR,AMPK和Wnt等;PI3K-Akt,mTOR等为经典的调节细胞自噬的信号通路。3.透射电镜观察自噬小体:merecidin处理细胞后,处理组A549和KO-MAPK1细胞胞质内发现被双层膜包裹细胞器自噬小体和自噬溶酶体。4.MDC染色检测自噬小体:merecidin处理细胞经MDC染色,在荧光显微镜下观察发现处理组A549和KO-MAPK1细胞质中大小不一、颗粒状绿色荧光。5.AO染色检测自噬溶酶体:merecidin处理A549细胞后经过AO染色,荧光显微镜下检测显示处理组A549和KO-MAPK1细胞核部分呈绿色荧光,细胞质部分呈红色荧光。6.CYTO-ID检测自噬小体及自噬溶酶体:merecidin作用于细胞后经CYTO-ID处理,荧光显微镜观检测显示处理组A549和KO-MAPK1细胞质内充满点状、颗粒状绿色荧光。7.Western blot检测蛋白表达:抗菌肽merecidin处理细胞后,Western blot结果检测显示:ATG5、ATG7、LC3II、ULK1、ATG13蛋白表达上调,P62、MAPK1蛋白表达下调。结论1.抗菌肽merecidin可诱导肺腺癌A549细胞发生自噬。2.抗菌肽merecidin通过MAPK1调控A549细胞自噬。