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目的:研究4E-BP1在原发性肝细胞肝癌中的表达,探讨p-4E-BP1在原发性肝癌发生和发展过程中的作用,分析磷酸化4E-BP1以及4E-BP1对细胞增殖、凋亡的作用。方法:采用免疫组化检测4E-BP1和p-4E-BP1蛋白在癌组织和癌旁组织及远癌组织中的表达,分析两种蛋白与患者年龄、性别、肿瘤分化程度、肿块大小、肝硬化程度、TNM分期及血管侵润之间的关系。体外实验部分:采用荧光实时定量PCR(qRT-PCR)和蛋白免疫印迹(Western blot)检测LO2细胞以及肝癌细胞HepG2和SMMC7721中4E-BP1与p-4E-BP1的mRNA和蛋白水平:微小RNA(siRNA)构建siRNA4E-BP1瞬时转染至HepG2细胞,倒置显微镜检测转染效率;qRT-PCR和Western blot(WB)方法检测稳定表达两种蛋白在HepG2细胞中4E-BP1和p-4E-BP1的mRNA转录及蛋白表达水平;WB、平板克隆、MTT和EDU流式检测si RNA-4E-BP1以及p-4E-BP1抑制剂(RAPA)、p-4E-BP1激动剂(IGF-1)和RAPA+IGF-1处理HepG2细胞后,4E-BP1与p-4E-BP1对HepG2细胞增值的作用;流式细胞仪检测siRNA-4E-BP1以及p-4E-BP1抑制剂(RAPA)、p-4E-BP1激动剂(IGF-1)和RAPA+IGF-1处理HepG2细胞后,4E-BP1与p-4E-BP1对HepG2细胞周期以及凋亡的影响;qRT-PCR和Western blot检测周期相关蛋白和凋亡相关蛋白的mRNA水平以及蛋白水平的变化。结果:4e-bp1在肝细胞癌组织、癌旁组织和远癌组织存在程度不一阳性表达率,分别为;61.7%(29/47),68.1%(32/47),78.7%(37/47),差异无统计学意义。p-4e-bp1在三种组织中的阳性率分别为74.5%(35/47),51.1%(24/47),38.2%(18/47),差异具有统计学意义(p=0.001);统计学分析显示:4e-bp1以及p-4e-bp1在肝细胞癌中的表达水平与患者年龄(p=0.536/0.336)、性别(p=0.186/0.639)、肝硬化程度(p=0.826/0.870)无相关性。4e-bp1与血清胎甲球蛋白水平呈负相关(p=0.000),与肿瘤分化程度正相关(p=0.181),而p-4e-bp1在肝癌组织中表达与组织的分化程度负相关(r=-0.348,p=0.016),与血清胎甲球蛋白水平及肿瘤大小,tnm分期等均呈正相关(p<0.05)。倒置荧光显微镜下观察转染组细胞内出现荧光,未转染组与nc组没有出现荧光;与其他两组相比,westernblot法检测显示,转染组4e-bp1蛋白水平显著降低(p<0.05);qrt-pc法检测显示,sirna-4e-bp1转染组细胞中4e-bp1mrna的转录水平明显降低(p<0.05)。mtt检测结果显示,与mock组相比;nc组hepg2细胞活力无显著变化;sirna-4e-bp1组细胞活力显著增加(p<0.05)。edu-流式细胞术检测结果显示,转染组细胞增殖能力较其他两组有所增加(p<0.05)。westernblot法检测显示,rapa能够抑制p-mtor、p-4e-bp1蛋白水平,同时使p16和p53蛋白水平增加(p<0.05);相反,igf-1诱导p-mtor、p-4e-bp1蛋白水平的同时使cyclind1和hur蛋白水平下降(p<0.05)。流式细胞术检测显示,与nc组相比,hepg2细胞在s期的比例明显增加,两组比例分别为38.89%和28.66%,而g0/g1期比例有所减少50.9%和56.5%,g2期比例无明显变化;westernblot法检测显示,cyclind1和hur蛋白表达水平上调,p16和p53的蛋白水平表达下调;细胞总体凋亡比例显著降低(p<0.01),细胞内bcl-2蛋白水平上调,bax蛋白水平下调。结论:1、磷酸化4E-BP1参与肝癌的发生、发展等过程。2、4E-BP1通过磷酸化能促进HepG2细胞增殖,抑制HepG2细胞凋亡。