【摘 要】
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本研究采用本实验室pIBV—S1质粒(DQ288927)构建自杀性DNA疫苗。通过PCR扩增在S1基因两端引入BamHⅠ酶切位点，经酶切插入自杀性DNA疫苗载体pSCA1，构建了自杀性DNA疫苗pSCA1-S1
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本研究采用本实验室pIBV—S1质粒(DQ288927)构建自杀性DNA疫苗。通过PCR扩增在S1基因两端引入BamHⅠ酶切位点，经酶切插入自杀性DNA疫苗载体pSCA1，构建了自杀性DNA疫苗pSCA1-S1质粒，经由菌落PCR、酶切及测序鉴定目的基因被成功克隆至自杀性DNA疫苗载体pSCA1，且方向正确。以1：20的配比加入脂质体作佐剂，制备了IBV S1基因的自杀性DNA疫苗。为证实所构建自杀性DNA疫苗pSCA1-S1质粒的正确表达，分别取等量的重组质粒pSCA1-S1、常规IBV S1基因DNA疫苗质粒pcDNA-S1、空载体pSCA1转染Vero细胞。48h后经间接免疫荧光试验观察发现，pSCA1-S1以及pcDNAS1转染组细胞浆均可见特异性亮绿色荧光，pSCA1空载体组无荧光为阴性。证实自杀性DNA疫苗载体能成功表达S1基因。为评价IBV自杀性DNA疫苗的免疫效果，分别用构建的自杀性DNA疫苗pSCA1-S1、常规DNA疫苗pcDNAS1、空载体pSCA1和IBV灭活疫苗、PBS液对照，免疫非免疫健康雏鸡。自免疫后每周采血分离血清连续五周，采用间接ELISA试验检测血清特异性抗体IgG，结果表明：自杀性DNA疫苗产生针对IBV的特异性血清抗体，免疫后第二周上升到峰值，随后开始下降，其抗体水平与常规IBV DNA疫苗差异不显著(P＞0.05)。用流式细胞仪(FACS)测定各组CD3~+、CD4~+、CD8~+动态变化，结果显示：自杀性DNA疫苗pSCA1-S1组CD3~+水平在14d和28d差异显著高于常规IBV DNA疫苗组(P＜0.05)；CD4~+水平在21d、35 d差异显著高于常规IBV DNA疫苗组(P＜0.05)；CD8~+水平只在35d差异显著高于常规IBV DNA疫苗组(P＜0.05)。表明自杀性DNA疫苗能诱导机体产生高水平的细胞免疫。攻毒保护试验结果表明：pSCA1-S1组攻毒相对保护率为60％；pcDNAS1组免疫鸡只相对保护率低于pSCA1-S1，为50％。本研究采用IBV S1基因构建自杀性DNA疫苗对鸡进行免疫，并对其免疫效果进行评价，在国内外还未见报道。本研究为研制IBV“自杀性”DNA疫苗提供了基础材料和科学依据。
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