基于线粒体凋亡途径探讨白屈菜红碱抗肿瘤作用的机制

来源 :上海中医药大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:hyhf_lwh
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目的:观察白屈菜红碱(chelerythrine,CHE)的抗肿瘤作用,并通过线粒体凋亡途径研究其作用机制。  方法:  1.MTT法观察白屈菜红碱对体外培养的人肝癌细胞Hep3B、HepG2、人肺癌细胞A549、人乳腺癌细胞Mcf-7等肿瘤细胞增殖的影响。  2.细胞平板克隆实验观察白屈菜红碱对体外培养的人肝癌细胞Hep3B集落形成的影响。  3.Hoechst33258染色法观察白屈菜红碱对体外培养的人肝癌细胞Hep3B凋亡形态改变的影响  4.流式细胞术、PI单染法观察白屈菜红碱对体外培养的人肝癌细胞Hep3B凋亡率的影响。  5.Real-time PCR法检测白屈菜红碱对体外培养的人肝癌细胞Hep3B凋亡通路上Bcl-2、Bax、Bcl-xl mRNA表达水平的影响。  6.Western blot法检测白屈菜红碱对体外培养的人肝癌细胞Hep3B凋亡通路上Bcl-2、Bax、Bcl-xl蛋白表达水平的影响。  7.膜电位检测、线粒体中及细胞浆中细胞色素C的检测、Caspase-9及Caspase-3蛋白含量检测等方法探讨对体外培养的人肝癌细胞Hep3B凋亡线粒体途径的影响。  8.建立人肝癌细胞Hep3B裸鼠移植瘤模型,考察白屈菜红碱在体内的抗肿瘤作用。  结果:  1.白屈菜红碱能抑制体外培养的人肝癌、肺癌、乳腺癌等细胞的增殖作用,且呈明显的量效依赖关系;其中对人肝癌细胞Hep3B抑制作用较强。  2.白屈菜红碱能显著抑制体外培养的人肝癌细胞Hep3B集落的形成。  3.在Hoechst33258细胞形态学实验中,可以在白屈菜红碱组观察到体外培养的人肝癌细胞Hep3B凋亡的特征性变化。  4.在PI流式实验中,观察到白屈菜红碱可以诱导体外培养的人肝癌细胞Hep3B的凋亡。  5.在Real-time PCR实验中,白屈菜红碱可以使体外培养的人肝癌细胞Hep3B中Bcl-2、Bcl-xl mRNA的表达降低,Bax mRNA的表达升高,与对照组比较,差异有统计学意义。  6.通过Western blot实验,白屈菜红碱可以使体外培养的人肝癌细胞Hep3B中Bcl-2、Bcl-xl蛋白的表达降低,Bax蛋白的表达升高,与对照组比较,差异有统计学意义。  7.通过线粒体途径相关的实验可以看出,白屈菜红碱使体外培养的人肝癌细胞Hep3B中线粒体膜电位下降,细胞浆中细胞色素C增多、线粒体中减少;Caspase-9及Caspase-3蛋白的表达升高。  8.体内实验表明,白屈菜红碱可以抑制裸鼠移植瘤的生长。  结论:  1.白屈菜红碱在体外能抑制多种肿瘤细胞的增殖,其机制可能与诱导细胞凋亡有关  2.在进一步研究中,白屈菜红碱可能通过线粒体凋亡途径诱导细胞凋亡。  3.白屈菜红碱在体内也可以抑制肿瘤的生长。
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