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槐属二氢黄酮G(Sophoraflavanone G,SFG)为豆科槐属植物苦参(Sophora flavescens Ait.)根中异戊烯二氢黄酮类成分,在苦参总黄酮中含量较高。药理研究表明SFG有多种药理活性,如抗菌、抗肿瘤、抗炎、抗疟、神经系统保护及潜在的皮肤美白作用等。然而,SFG结构中的薰衣草烷基(lavandulyl)侧链是否会影响化合物的水溶性,是否影响其口服吸收及发挥疗效,基于此,本研究在考察SFG基本理化性质及大鼠体内药动学的基础上,提出采用自乳化释药系统(Self-emulsifying drug delivery system,SMEDDS)技术来提高SFG的口服生物利用度。具体,开展了以下五方面研究。1 SFG分离制备及结构鉴定首先,以乙酸乙酯为提取溶媒,采用超声法制备苦参总黄酮提取物。其次,采用硅胶柱层析、ODS反相柱层析等方法分离,得到淡黄白色粉末,经HPLC面积归一化法测定纯度在98%以上。该粉末经UV、IR、NMR鉴定,与文献报道的(2S)-8-薰衣草基-5,7,2’,4’-四羟基二氢黄酮化合物的数据对照,基本一致,确定其结构为SFG。2 SFG处方前研究2.1 SFG基本理化性质研究采用HPLC法,以Dikma C18为色谱柱,甲醇-水为流动相,建立了 SFG的定量分析方法,检测波长为296nm。方法学考察表明:SFG的线性关系良好,加样回收率、精密度、重复性、稳定性的RSD均小于2.0%。采用平衡溶解度法测定SFG的表观溶解度,正辛醇-水系统测定SFG的表观油/水分配系数,紫外分光光度法测定SFG的pKa值等。结果表明,SFG属极微溶药物(根据2015版《中国药典》规定);在不同pH值条件下油水分配系数均大于1,表明SFG的脂溶性较好;SFG的pKa值为7.15±0.44。2.2 SFG大鼠体内药物动力学研究以SD大鼠为实验动物,建立了血浆样品中SFG的UPLC-MS/MS分析方法。采用ACQUITYUPLC?HSS T3 C18色谱柱,乙腈-0.1%甲酸水为流动相梯度洗脱,流速0.2 mL/min,待测血浆样品采用乙酸乙酯液液萃取法制备。MS/MS采用电喷雾离子化电离源(ESI),多反应离子监测(MRM),负离子方式检测,芦丁为内标。m/z分别为423.2→161.2(SFG)和 609.3→300.3(芦丁)。方法学结果表明,SFG 在 0.08~160 ng/mL 的浓度范围内有良好的线性关系(R2=0.9975);日内、日间精密度和稳定型的RSD均小于15%,回收率在79.6%~83.5%之间。静脉给药后T1/2z为0.169 h,AUC0→∞为271.031μg×h/mL,MRT0→∞为 4.784h;口服后T1/2z为 1.903h,Tmax为 2.167h,AUC0→∞为492.909μg×h/mL,MRT0→∞为11.417h;SFG在大鼠体内的绝对生物利用度约10.3%,提示SFG 口服吸收生物利用度可能偏低。3 SFG-SMEDDS给药系统研究采用HPLC法建立SFG定量分析方法,通过考察SFG在不同辅料中的饱和溶解度,油相与乳化剂的配伍实验及绘制三元相图等方法确定SFG-SMEDDS处方中辅料的种类及用量。结果表明,以Ethyl Oleate-Cremphor RH40-PEG400的体系形成自微乳的区域面积最大,基于此确定了 SFG-SMEDDS的处方油相为Ethyl Oleate、乳化剂为Cremphor RH40、助乳化剂为PEG-400。在此基础上,以自微乳体系的粒径、乳化时间和载药量作为处方评价的因变量,通过D-optimal混合实验设计优化了各成分的最佳比例,获得了优化处方,即 Ethyl Oleate 38.5%,Cremophor RH40 47.5%,PEG-400 14.0%,载药量20mg/g。采用单因素考察了温度、搅拌速度等,确定了 SFG-SMEDDS的制备工艺条件。4 SFG-S-SMEDDS的制备及初步稳定性研究以固体吸附材料吸附量、固体吸附材料对乳化效率的影响为指标,考察了固体吸附材料的种类及用量,结果确定甘露醇为固体吸附材料,以SFG-SMEDDS与甘露醇的质量吸附比例为1:2制备SFG-S-SMEDDS。SFG-S-SMEDDS分散后粒径为38.5±1.0nm,乳化时间为34.6±1.4s,电位为-39.1±1.8mV,PDI为0.15±0.02溶液呈现淡蓝色乳光,所制备的SFG-S-SMEDDS透射电镜下均匀呈现类球的实体粒子,分布均匀。采用溶出度测定法,以SFG含量为指标,测定SFG、SFG-S-SMEDDS的体外累积释放百分率。结果表明,SFG-S-SMEDDS在前10min的溶出速率达到50%,30min时达到80%,明显优于SFG,体外实验表明SFG制成固体自微乳后,能有效的提高其溶出速率。5 SFG-S-SMEDDS相对生物利用度的研究采用UPLC-MS/MS方法分析大鼠血浆样品,对SFG-S-SMEDDS大鼠体内药物动力学进行了研究。结果表明,与SFG的混悬液相比,SFG-S-SMEDDS药时曲线下面积明显大于CMC-Na混悬液本身,口服后SFG自微乳后T1/2z为3.200h,Tmax为0.792h,AUC0→∞为652.977μg×h/mL,MRT0→∞为11.278h;SFG在大鼠体内的相对生物利用度约343.84%,表明SFG制成自微乳后能有效的提高生物利用度。