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南瓜(Cucurbita)是我国的传统蔬菜,在我国有500多年的栽培历史,种质资源丰富。除作为蔬菜食品外,因其根系发达、生长势强健,抗病抗逆性强,也作为瓜类砧木使用。随着瓜类保护地栽培时间的延长,土壤次生盐渍化日益严重,成为蔬菜生产中提高产量和品质的限制性因素。瓜类蔬菜实施嫁接栽培是一项有效克服保护地土壤次生盐渍化的措施。现有的瓜类砧木耐盐性不强,难以适应土壤次生盐渍化条件下嫁接生产的需求。南瓜不同资源间抗病抗逆性差异较大,筛选特异抗逆性强的砧木资源成为目前育种的热点方向。采用传统的育种方法培育耐盐瓜类砧木品种还未获得实质性的进展,通过基因工程进行种质创新和品种改良成为提高南瓜耐盐性的一个便捷有效的重要途径。建立高效稳定的南瓜再生体系是成功开展基因工程育种的前提,同时也可为进一步开展基因功能研究与遗传转化等相关育种工作奠定基础。本研究以印度南瓜“北观”的子叶节为外植体,探究消毒处剂类型和时间处理、种子不同预处理、培养基类型、胚根摆放方式、激素种类和浓度、外植体苗龄、外植体切割方式等因素对再生频率影响的相关因素;利用根癌农杆菌介导将StNHX1基因导入印度南瓜“北观”中,用PCR技术检测载体pCAMBIA3301-StNHX1是否存在农杆菌中,同时利用梯度PCR来确定引物的最佳退火温度,并探究抑菌剂的脱菌次数、抗生素筛选浓度、农杆菌侵染浓度、农杆菌侵染时间、共培养时间、乙酰丁香酮等因素对转化效率的影响;对获得的抗性植株进行GUS染色检测。以期能够建立印度南瓜“北观”的高频再生体系和StNHX1基因转入再生苗的系列方法,为培育南瓜耐盐新种质奠定了技术基础。取得了以下研究结果:(1)建立了印度南瓜“北观”子叶节的高效再生体系:将去壳种子用25℃的无菌水浸种5h后用75%酒精消毒30s,再用0.1%升汞消毒9min,用无菌水冲洗3-4次,在置有滤纸桥含有少量无菌水的150ml广口瓶中黑暗培养催芽;待胚根0.5cm左右时,将胚根直接插入MS培养基中获得无菌苗;取“子叶微展,颜色绿色”的无菌苗的子叶节,切除子叶节的1/2后,再纵切为二作为外植体;将外植体置于最佳不定芽分化培养基MS+1.0mg/L6-BA+4.0mg/L AgNO3上;不定芽易诱导生根的最佳生根培养基为MS培养基;具有2-3条根系的幼苗经驯化移栽可长成完整植株。(2)探究了通过根癌农杆菌介导将耐盐StNHX1基因导入印度南瓜“北观”子叶节中的主要影响因素:采用梯度PCR扩增仪得出引物的最佳退火温度为54℃,菌液PCR检测到载体pCAMBIA3301-StNHX1存在活化的农杆菌中;取经过预培养36h的子叶节,用活化的农杆菌菌液OD600(0.3-0.5)侵染10min,在无菌吸水纸上吸干表面液体,在共培养基中培养2d(培养基中添加200μmol/LAS),将共培养后的外植体用附加羧苄青霉素的无菌水脱菌3次数,用无菌吸水纸吸干表面液体,然后置于筛选培养基:MS+1.0mg/L6-BA+4.0mg/L AgNO3+250mg/L Carb+3mg/L双丙氨膦进行不定芽诱导培养。(3)通过GUS组织化学法检测,获得2株阳性植株。