驼峰藤的化学成分及药理活性研究

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驼峰藤(Merrillanthus hainanensis Chun et Tsiang)属于萝藦科驼峰藤属,在我国分布狭窄,根据标本记录,仅在我国广东、海南及云南省有分布,生长于低海拔至中海拔山地林谷中,属国家二级重点保护物种。该物种于1941年由中国著名的分类学家陈焕镛教授和蒋英教授在海南省白沙县首次发现并命名。驼峰藤在萝藦科植物系统演化中不仅具有重要的科研价值,还具有广阔的观赏和药用价值。尽管驼峰藤已有80多年的发现历史,但除了侯俊等研究驼峰藤的组织培养和快速繁殖外,国内外尚无对驼峰藤的化学成分及药理活性进行系统性的研究报道,驼峰藤的化学成分和药理作用尚不清楚。从生物多样性方面而言,每一个物种的存在,对生态环境都有着不可轻视的作用。驼峰藤作为一种稀少的藤本植物,保护其种群、探究其药用价值意义深远。本论文首先比较家种和野生驼峰藤的DNA序列和HPLC指纹图谱。我们成功获得了家种和野生驼峰藤的ITS序列,结果显示家种和野生驼峰藤的ITS序列一致,与该序列相似性最高的为萝藦科植物娃儿藤属植物的ITS序列,高达96.7%。同时,我们基于ITS序列,通过NJ法构建系统聚类树,结果表明,驼峰藤与小叶娃儿藤亲缘关系较近,而与翅果藤和海岛藤的亲缘关系较远。此外,通过比较家种驼峰藤与野生驼峰藤的HPLC色谱图可知,二者的图谱一致,含有12个共同的色谱峰。为进一步阐明其活性成分,本论文对驼峰藤进行了初步的化学成分研究,从95%乙醇提取物的乙酸乙酯萃取部位分离得到20个化合物,综合运用MS、NMR、UV、IR谱等现代波谱技术和化学方法鉴定了这些化合物的结构,分别为3-O-[α-L-cymaropyranosoyl-(1→4)-β-D-digitoxopyranosoyl-(1→4)-β-D-oleandropyranosoyl]amplexicogenin A(TFT-1)、3-O-[α-L-oleandropyranosoyl-(1→4)-β-Ddigitoxopyranosoyl-(1→4)-β-D-oleandropyranosoyl]amplexicogenin A(TFT-2)、Amplexicoside G(TFT-3)、Atratcynoside F(TFT-4)、Avellanedae A(TFT-5)、Urs-12-en-3β-O-9E,12E-octadecadienoate(TFT-6)、3,4-seco-lup-20(29)-en-3-oic acid(TFT-7)、β-谷甾醇(TFT-8)、阿魏酸(TFT-9)、邻苯二甲酸二丁酯(TFT-10)、对羟基苯甲醛(TFT-11)、二氢猕猴桃内酯(TFT-12)、生育酚醌(TFT-13)、α-亚麻酸(TFT-14)、9(S)-羟基-10E,12Z-十八碳二烯酸(TFT-15)、1-[(12E,16E)-12,16-二十碳二烯酰基]-2-[(E,E)-7,11-十八碳二烯酰基]-3-硬脂酰基甘油(TFT-16)、Chlorophyllide a(TFT-17)、Ethoxyphaeophorbide a(TFT-18)、3-吲哚甲醛(TFT-19)、桂皮酸(TFT-20),其中TFT-1和TFT-2为新化合物,其它化合物均是首次从该属植物中得到。我们还通过气相色谱-质谱(GC-MS)联用来比较驼峰藤茎,花和叶中石油醚提取物的化学成分,分析显示这三个部位具有相同的主要成分,其主要成分都包括β-香树脂醇(1)和3α-齐墩果烯-12-乙酸酯(2)。在化学成分研究的基础上,我们对部分化合物进行了细胞毒性、抗菌和抗炎活性的筛选,研究发现部分化合物对Hep G2、A549、He La和MCF-7肿瘤细胞有微弱的生长抑制活性,其中对MCF-7细胞的抑制活性最明显。比较部分化合物对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌抗菌活性,发现化合物对大肠杆菌比金黄色葡萄球菌更敏感。同时发现,驼峰藤的茎,花和叶对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌均显示一定的抗菌活性,但对大肠杆菌更敏感。我们还对各萃取部位和化合物的抗炎活性进行筛选,发现乙酸乙酯部位、化合物TFT-5和TFT-9有一定的抗炎活性,抑制率分别为71.3%、78.9%和73.4%,其它部位和化合物均无明显抗炎活性。此外,本论文首次建立了HPLC测定驼峰藤中Amplexicoside G(TFT-3)含量的方法,并对广东地区12批不同季节驼峰藤样品中TFT-3的含量进行了测定,其含量范围为4.31~14.79μg/m L,这说明不同季节和不同批次驼峰藤样品TFT-3的含量存在一定差异,其中春季采摘的驼峰藤样品中TFT-3的含量明显高于秋季采摘的驼峰藤样品。此外,我们还分析了茎和叶中的化学成分,发现叶中TFT-3的含量高于茎,这为驼峰藤的质量评价提供科学依据。
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